概述

        把切碎的骨组织块放入培养瓶，按常规组织块法进行培养。如在培养液中加入抗胶原血清，可抑制成纤维细胞成长，但对成骨细胞生长无影响;常用骨小梁或新生鼠、兔、人胚胎颅盖骨标本。

用品

        同常规组织块法。

步骤

        (1)取手术获得的骨标本，室温下用无菌生理盐水冲洗数次，如不能立即使用，可浸泡于含12%胎牛血清及青霉素、链霉素的Ham'sF12培养液中，放在4℃冰箱过夜。

        (2)用平衡盐液(含100U/mL 青霉素和100μg/mL链霉素)冲洗标本。

        (3)在培养皿中切下标本上的骨小梁，将骨小梁放入第2个皿。

        (4)加入10mL Hanks 液浸没骨小梁组织，洗数次除去血污及脂肪。

        (5)在25cm²的培养瓶中加入2mL完全培养液，在CO₂，孵箱中预培养20min使培养液匀化，必要时可用CO₂、4.5%NaHCO₃,或 HCI 调 pH 值。

        (6)把骨小梁组织切成1~3mm³的碎块。

        (7)从预培养的瓶中除去培养液，重新加入2.5mL新鲜Ham's F12培养液，移入25~40个骨小梁组织块将培养瓶竖放或瓶底向上，用组织接种环将骨小梁碎块均匀地铺散在培养瓶底壁上，37℃，培养2h后轻轻将瓶底翻转向下，继续培养5~7d,观察细胞生长情况，酌情换液为避免组织块从瓶底脱落，移动培养瓶时要轻缓。

        (8)细胞长满时可除去组织块，用胰蛋白酶消化离心法收集细胞，传代培养。