全血、血浆与血清

        全血是指包含血细胞和血浆所有成分的血液。采集全血时，需要在收集管中添加抗凝剂。常见的抗凝剂有肝素、柠檬酸钠以及乙二胺乙酸，选择哪种抗凝剂需根据具体研究的要求来决定。

        血浆是将全血通过抗凝处理后，经离心分离得到的液体，里面不含细胞成分，但含有纤维蛋白原和凝血因子等成分。而血清则是未经过抗凝处理的全血，血凝块收缩后释放出的液体，这种液体里面不含纤维蛋白原和凝血因子。分离血浆和血清时，一般使用2200-2500rpm的离心速度，至少离心15分钟。

溶血现象

        正常的血清或血浆样本应呈现黄色清液。如果样本呈现偏红色，通常是因为红细胞破裂，出现了溶血现象。

        为避免溶血，采血时应注意以下事项：

1. 在采血时要防止小鼠的毛发或油脂污染血液，这些污染物可能导致溶血。使用的容器和注射器必须保持干净干燥，避免接触水或有机溶剂。
2. 抽血时要避免速度过快，过快的抽血可能导致气泡产生。如果使用止血带，止血带不应绑得时间过长。
3. 在将血液放入试管时，应先拔掉针头（注射器抽血时）再进行放血，同时控制放血速度，避免过快。
4. 在收集并分离血清时，应尽量确保血液直接流入试管底部，避免血液与管壁或管盖接触，因为这些部分可能会在离心过程中引起溶血。

完整的采血流程

        采血技能在临床辅助诊断和监测病情进展中至关重要。采血不仅仅是静脉穿刺并通过注射器吸取血液的过程，它还包括确保血样安全存放和保持其完整性，并在采集过程中全程细致照护。

 仔细计划，选择合适器材

        采血需要准备和计划，包括采血前必须进行充分的准备和计划，这包括确定采血量、选择采血部位、确定采血方法以及采血的顺序，确保采血过程顺利进行。对于细小且脆弱的静脉，选择较小规格的针头会更加适合；而对于较大的血管，选择较大规格的针头能提供更好的血流，适合进行快速且大容量的采血。采血体积的选择也应根据注射器的尺寸来决定。采血量、采血部位、采血方法和采血顺序，确保采血成功。对于脆弱和细小的静脉，需要一个小规格的针头；如果血管大小允许，大规格的针头能为快速、大容量的采血提供最佳血流。采血体积也决定了注射器尺寸。

采血体积的确定

        在实验动物采血时，必须注意避免一次性采血量过大或采血过于频繁，因为过度采血可能会影响动物的健康，导致贫血，甚至危及生命。采血的可接受量和频率要根据动物的循环血液量来判断。常用实验动物的循环血量可以参考下表：

（来源：https://doi.org/10.1002/jat.727）

        以25g的成年小鼠和250g的成年大鼠为例，通过上表计算可得一只体重为25g的小鼠循环血量约为：

        0.025kg×72mL/kg=1.8mL

        一只体重为250g的大鼠循环血量约为：

        64mL/kg×0.25kg=16mL

        由于小鼠体重限制，一次取血后需要一定的恢复期以保证下次血液样本的质量，下表给出了不同采血量对应的恢复期：

 

（来源：https://doi.org/10.1002/jat.727）

        综合以上，我们一般采取以下原则进行采血：

        （1）单次采血量限制：单次采血量不应超过动物循环血量的10%。以25g的小鼠为例，其单次采血的最大量为：

0.025kg×72mL/kg×10%=0.18ml

        （2）多次采血限制：若实验需要进行多次采血，每周的最大采血量不超过循环血总体积的7.5%；每两周的最大采血量不超过循环血总体积的15%。以250g的大鼠为例，计算其两周内的最大采血量为：

        0.25kg×64mL/kg×15%=2.4ml

        （3）超过采血量的情况：只有在动物安乐死后，或者经过深度麻醉并处于终点期时，才可以超过血液采集的最大量。

（来源：https://doi.org/10.1002/jat.727）

合适的采血部位

（来源：《实验动物科学》）

采血方法的确定

        此外，许多常见的采血方法都需要麻醉，麻醉方法应根据实验需求来选择。由于很多同学从事小动物实验，以下将以大小鼠为例，简要介绍常见的采血方法及其特点：

        由于采血量的不同，因而采血的部位也不同。

 

        由于不同采血方法对动物身体的损伤程度和操作要求各不相同，建议在满足实验需求的前提下，选择简单易行且对动物伤害较小的采血方式。

少量血液检验

        对于需要较少血液的检验，如红、白细胞计数、血红蛋白测定、血液涂片以及酶活性微量分析等，可以通过刺破组织取毛细血管血液来完成。

较多血液采集

        当需要较多血液时，可以采用静脉采血。如果需要进行多次采血，应从离心脏较远的一端开始，以防止栓塞，从而避免影响整条静脉。

动脉血液采集

        在研究毒物对肺功能的影响、血液酸碱平衡、水盐代谢紊乱等问题时，需要采集动脉血液来测定血氧分压、二氧化碳分压、pH值以及K+、Na+、Cl-离子浓度等参数。

小鼠非终末采血

        若只有一到两次采血，眼眶静脉采血比较适合，操作简单且能获得较多血样，但需要麻醉。

        若需要间断多次采血，则推荐使用颌下静脉采血或隐静脉采血，这两种方法在采血前不需要麻醉，且对小鼠伤害较小，采血量与眼眶静脉采血法相当，且恢复较快。

大鼠非终末采血

        对于大鼠，无论是单次还是多次采血，推荐使用注射器进行颈静脉采血，操作方便，可以随抓随采。如果不从尾静脉给药，尾静脉采血也是一种非常推荐的方式。

        对于大小鼠的终末采血，通常推荐在安乐死或深度麻醉后进行心脏采血。这种方法适用于较大血量采集，并且能够有效避免血液污染。

采血操作注意事项

        不同的采样管需要特定检测样本，应事先计划合适抽血顺序，以防止由于试管添加剂污染而产生错误结果。采血时要注意：

        ①采血场所有充足的光线；室温夏季最好保持在25～28℃，冬季以15～20℃为宜；

        ②采血用具与采用部位一般需要进行消毒；

        ③采血用的注射器和试管必须保持清洁干燥；

        ④若需抗凝全血，在注射器或试管内需预先加入抗凝剂。

 

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