一、实验原理

酶联免疫吸附检测（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，简称ELISA）是一种灵敏的免疫分析技术，用于检测和定量样本中的特定抗原或抗体。

ELISA的基本原理涉及将抗原或抗体固定在固相载体上，并将抗原或抗体与酶标记的抗体或抗原结合。这一过程允许通过酶催化的颜色反应来检测样本中的目标分子。

ELISA技术因其高灵敏度、高特异性和易于自动化操作的特点，在临床诊断、生物研究和食品安全等领域得到广泛应用。它可以用于检测各种类型的分子，包括蛋白质、激素、病毒和细菌抗原等。

二、实验流程

1、固相载体准备：将抗原或抗体固定在微孔板等固相载体上。这一步通常通过物理吸附或共价结合完成。

2、封闭：为了减少非特异性吸附，使用封闭剂（如BSA或脱脂奶粉）覆盖固相载体表面。

3、样本孵育：将待检样本加入微孔板中，样本中的待测抗原或抗体与固相载体上的配对分子反应。

4、洗涤：孵育后，通过洗涤步骤去除未结合的样本成分。

5、酶标记抗体/抗原孵育：加入酶标记的抗体或抗原，这些标记物与样本中的待测分子结合。

6、洗涤：再次洗涤，去除未结合的酶标记抗体/抗原。

7、底物添加：加入底物溶液，该底物能够被结合在固相载体上的酶催化转换成有色产物。

8、显色反应：酶催化底物产生有色物质，显色反应的程度与样本中待测物质的量成正比。

9、终止反应：在一定时间后，加入终止液停止酶的活性。

10、定性或定量分析：通过肉眼观察、酶标仪测量吸光度（OD值）等方式，对产生的有色产物进行定性或定量分析，从而确定样本中待测物质的含量。

三、送样要求

1、动植物组织样品（干冰运送）：

准确称量动物组织重量，按重量（mg）与容积（μl）1:9的比例添加9倍容积的匀浆物质（建议使用0.9%的生理盐水）。

使用匀浆机进行匀浆，制备成10%的匀浆料。

取上清液，使用干冰进行运输。

2、血清、血浆样品（干冰运送）：

将样本分装并密封，存放于-20℃或-80℃的冰箱中，避免反复冻融。

使用干冰进行运输。

3、细胞样本：

清除培养基，将离心后的细胞放入液氮或-80℃的冰箱中保存。

确保细胞总量不低于107个，使用干冰进行运输。