细胞名称：Caco-2（人结直肠腺癌细胞）。

细胞别称：CaCo-2; CACO-2; Caco 2; CACO 2; CACO2; CaCo2; CaCO2; Caco2; Caco-2/ATCC。

生长特性： 贴壁。

培养条件： DMEM+20% FBS+1% P/S。

培养环境： 空气，95%；二氧化碳（CO₂），5%；37℃。

细胞简介： Caco-2细胞分离自一名72岁结肠腺癌白人男性患者直肠原位癌。当长到满时，Caco-2细胞表现出特征性的肠上皮细胞分化。Caco-2细胞表达热稳定肠毒素（Sta，大肠杆菌）、表皮生长因子（EGF）、维生素A酸结合蛋白I和视黄醇结合蛋白II，并呈角质蛋白阳性。Caco-2细胞可以用于3D细胞培养、高通量筛选、癌症研究和毒理学研究，也是一种合适的转染宿主。

1. Caco-2细胞贴壁慢，特别是刚复苏时，一般2～3天贴壁展开，会有气泡。

2. 细胞在传代时注意消散，不然难以贴壁。

3. 细胞成片生长，细胞密度越大，表面空泡黑点越多。

4. 一般细胞长至80%传代，细胞成片，其实密度很大。

5. 细胞生长太满对细胞状态影响严重，传代后易破碎和死亡。

6. 细胞生长时间越久，消化难度随之增加；消化到轻拍培养瓶侧边细胞可以滑落时，可以终止消化。

1. DMEM高糖+20%胎牛血清的完全培养基：对血清含量要求高（高需求）。

2. 向新的10mL离心管中预先加入2mL完全培养基（完培的量应≥后续消化所用胰酶的量，确保完全终止消化，可根据情况自行调整）。

3. 胰酶1mL加入T25培养基中（若是T75则可以加2mL），消化3min后拿出，拍打瓶壁，吹吸后加入预先准备的含完全培养基的离心管中（注意动作轻柔，不要强行吹打，否则会损伤细胞），观察瓶底若有大量细胞未消化下来可以尝试拍打瓶壁。

4. 经过1mL胰酶消化后。

5. 若贴壁细胞仍较多，可以继续加1mL胰酶消化3min，重复上述步骤，一般消化两次细胞量就足够了。

6. 若观察到细胞脱落，但有大量细胞留在瓶底，可用1mL完全培养基冲洗后转移到离心管中。

7. 1000rpm，25℃，离心5min，注意配平。

8. 离心时，标记新的T25培养瓶（日期、姓名、细胞名称、代数等），并加入4.5～5mL的完全培养基（T75可以放14.5～15mL作用），备用离心管内弃上清，用1mL完全培养基（传代）或无血清细胞冻存液（冻存）吹打混匀细胞团块，注意动作轻柔，按照1：2传代到T25培养瓶中，若是T75可以1T25对应传1个T75。

9. “米”字型摇匀后放培养箱。

10. 隔48小时候观察细胞状况，一般72小时就能长满了，中途不需要换液，若传代五天细胞还没长起来，则要分析原因，调整实验操作。

80%-90%的细胞密度

1. 提前将水浴锅预热至37℃，培养基复温至室温或37℃，离心机设置好转速。

2. 将细胞从液氮罐取中出，观察管内无液氮的情况下，捏住管盖，将细胞冻存部分浸入水浴锅迅速摇晃，细胞融化至米粒大小冰块时终止水浴，融化过程不超过2min。

3. 直接将冻存管以离心力150g(约900rpm)左右离心2min，不同离心机具体转速会有差异。

4. 离心完成后弃上清，用预热的培养基缓慢加入冻存管，轻柔重悬细胞后接种至培养瓶中，轻轻混匀后放入培养箱。

5. 复苏48小时后观察，若细胞已贴壁，换液一次，放回培养箱继续培养。若细胞未贴壁，继续培养24小时再观察。