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抗癌药物敏感性试验方法繁多,大体上可分为体外与体内二类方法。每种方法各有其优点和局限性,单用某一种方法难以肯定药物抗癌作用,应根据实际情况选择适当的方法。
6.3.1 试验药物储备液的配制
一般按试验最高浓度的100倍配制储备液。根据不同的药物,可用生理盐水、75%乙醇或二甲基亚砜(DMSO)溶解。溶剂在培养中的浓度不宜过大,一般为0.5%~1%。储备液在-70℃下可保存2 ~3 周。
体外药物敏感性试验所用药物浓度一般根据已知临床血浆高峰浓度的0.1倍、1.0倍及10倍的剂量进行,亦可参考下述公式推算。
试验药物浓度(μg/mL)=[(mg x 平均体表面积)/(平均体重)]x(100/60)
实验时,一般设3~5个对数级浓度但因方法不同,所用药物浓度亦有差异。药物作用时间可因实验方法而异,如短期法只需1~3h;中期法如采用MTT法需4~6d;长期法如采用集落试验则需2~3周等。
6.3.2 受试细胞的准备
根据试验目的可选用体外培养的肿瘤细胞系如国际通用的人宫颈癌细胞系 Hela和人口腔癌细胞系KB等,也可用肿瘤患者的新鲜手术标本。后者需要采用机械分散法或酶消化分离出肿瘤细胞,制备成细胞悬液供试验用。
6.3.3 药物疗效的评价
(1)体外抑瘤试验:合成化合物或植物提取物纯品的半数抑制浓度IC50<10μg/mL或植物粗提物的IC50<20 μg/ml,并且有细胞毒性的剂量依赖关系,其最高抑制效应达80%以上;发酵液IC50应大于1:100时可判定样品在体外对细胞有杀伤作用
(2)体内抑瘤试验:实体瘤的疗效以瘤重抑制百分率表示,即瘤重抑制率=(1-试验组瘤重/对照组瘤重)x100%。中草药抑制率大于30%,合成药大于40%,且有统计学意义,重复3次,疗效稳定,则评定有一定抗肿瘤作用。
腹水型肿瘤的疗效可以生命延长率表示,即生命延长率=(试验组存活天数/对照组存活天数-1)x100%。非腹腔给药时生命延长率大于50%,腹腔给药生命延长率大于75%,并有统计学意义,连续3次,疗效稳定,则评定有一定抗肿瘤作用。