实验结果波动，常见根因之一是保存条件与取用方式不一致，进而引发活性衰减、结构损伤或污染累积。本文按样本类型给出可直接执行的保存方案，并补充标签与台账要点，便于团队统一管理标准与追溯。

        保存的核心变量：温区、时间、冻融次数、容器与密封

        保存目标通常包括：抑制酶促与化学反应速率、减少微生物增殖、降低冰晶与渗透压变化带来的结构破坏。实践中最影响复现的变量集中在四点：温区选择、分装策略、容器与密封、信息可追溯。

图1 CO₂培养箱（细胞短期培养与短期周转）

图2 冻存降温容器/程序降温盒（控制降温速率）

 

细胞样本

        1）悬浮细胞

        短期（约1–2天）：离心收集后弃上清，补新鲜培养基重悬，置于37℃、5%CO₂培养条件。

        长期：使用含DMSO与血清的冻存体系，按常用冻存密度分装至冻存管；采用缓慢降温方式后转入-80℃过夜，再转液氮长期保存。记录信息建议包含：细胞名称、来源、代数、冻存日期、冻存液配方与操作者。

图3 -80℃超低温冰箱（长期保存与统一管理位置）

图4 规范标签示例（样本信息可追溯）

 

2）贴壁细胞

        短期：更换新鲜完全培养基，维持常规培养条件；如需降低污染风险，可按实验室规范加入抗生素体系并注明批次与终浓度。

        长期：消化收集后按冻存流程执行，关键在于降温速率控制与信息记录完整。

图5 生物安全柜（无菌操作与污染风险控制）

 

菌种样本

        1）甘油管冻存（推荐用于长期稳定保存）

        甘油作为保护剂可降低冻存过程中冰晶损伤风险。常用流程为：对数期菌液与甘油保存液按比例混合，分装1–2mL/管；缓慢降温至-80℃，再转液氮长期保存。建议统一OD窗口、甘油终浓度与灭菌方式，并在标签中标明菌株、载体抗性、培养条件与冻存日期。

图6 冻存管盒/定位管理（分装后定位、减少开箱暴露时间）

 

组织样本

        1）新鲜组织短期保存

        短期（约1–2天）可置于预冷生理盐水或组织保存液中，密封后4℃保存；重点在于运输与存放过程的持续低温与密封。

        2）长期保存：冻存或固定

        冻存路线：建议切分为小体积组织块（例如≤1cm³量级），进入含保护剂的冻存体系后分装，缓慢降温后转-80℃或液氮。

        固定路线：常用固定液浸没固定，密封4℃保存；需标明组织来源、取材部位、固定开始时间与固定液类型，避免后续病理与分子实验解释困难。

图7 液氮杜瓦罐（低温转运与取放）

图8 液氮储罐（超长期低温保存体系）

 

液体样本：血液、血清/血浆、上清、外泌体

        1）全血

        短期用于部分检测时，可收集至含抗凝剂采血管，轻柔混匀后4℃保存并尽快处理。长期保存更推荐分离血浆或血清后再冻存。

        2）血清/血浆与细胞上清

        分离后建议立即分装至密封性好、低吸附的无酶管中，按用途选择-20℃或-80℃保存。对蛋白与活性分子敏感的体系，分装与冻融次数控制通常比单纯延长保存时间更关键；必要时可按体系加入蛋白酶抑制剂并记录配方与加入时间点。

图9 离心机（血清血浆分离、细胞收集与上清处理）

 

3）外泌体

        外泌体对冻融、剪切与容器吸附较敏感。常用策略是：分装为单次用量，尽量减少空气空间与反复冻融；短期可4℃，长期建议-80℃，更长期可液氮。若采用固定观察路线，应记录固定剂、固定时间与清洗流程，确保后续结果可解释。

 

核酸与蛋白

        1）DNA/质粒
        相对稳定，短期可4℃，长期常用-20℃或-80℃。建议标明浓度、溶剂体系与反复取用次数。

        2）RNA
        对RNase极敏感。建议使用无RNase体系、分装保存于-80℃，并在标签中写明样本名、日期、浓度与溶解体系，减少开盖暴露时间。

        3）蛋白
        按用途与稳定性选择-20℃或-80℃，并结合蛋白酶抑制剂策略。用于WB等实验的样本可在定量后按流程加入上样体系并记录处理条件，避免团队成员在“是否已变性、是否已加还原剂”等关键信息上出现不一致。

 

试剂与耗材

        试剂保存的主要风险来自：光照、温度波动、湿度、氧化、pH变化、微生物污染与容器相容性问题。建议建立三类统一记录：开封日期与有效期策略、存放位置与危险性标签、异常状态记录（变色、析出、浑浊、泄漏、结晶、异味等）。涉及毒性、腐蚀性或挥发性试剂，应按实验室安全制度与当地法规执行存放、通风、二次容器与废弃物管理。

图10 GHS危险品标签示例（化学品标签与风险分级参考）

 

标签与台账

        建议最低标签字段统一为：名称/编号、样本类型、浓度或关键参数、日期、操作者、保存温区、冻融次数或分装编号。

        台账建议支持按项目、按样本类型、按冰箱位置、按日期范围检索，并能追溯到来源批次与处理步骤，减少“找不到样本”“不确定是否还能用”等非技术性损耗。

        我们已经整理了一份可直接使用的电子版台账（用于日常登记与管理）。如果你也需要，欢迎扫描下方二维码添加小助理微信领取；添加时备注【电子台账】即可。