概述

        3种肌细胞都可用组织块法或酶消化进行原代培养，在培养过程中还观察到分化的不同阶段。心肌细胞在培养的最初几天还具有自动节律性收缩功能，传代培养时可能逐渐丧失这种功能。平滑肌细胞可通过胰蛋白酶或胶原酶消化法从血管壁、气管壁及肠壁等获得。肌细胞含有数种抗原标记物，如肌浆球蛋白、原肌凝蛋白等。肌动蛋白可在大多数细胞中发现，但并非肌细胞的特有标记物;肌细胞分化时肌酸磷酸激酶活性升高。骨骼肌和心肌的最明显特征是自动收缩，在倒置显微镜下即可观察到。下面以骨骼肌细胞为例介绍培养方法。
用品

        (1)剪刀、钳、解剖刀、通用容器或离心管、塑料盒、离心机、吸管。

        (2)6cm培养皿、25 cm²培养瓶。

        (3)含抗生素的PBSA、无血清培养液(F10与DMEM，1:1)加10%胎牛血清、胶原酶(2000U/mL)。

        (4)3~4d龄大鼠。

步骤

        (1)断颈法处死大鼠，70%乙醇清洗，无菌纸拭干。无菌条件下剥皮，分别从肩关节和髋关节处解剖四肢，切除爪，将四肢置入PBSA抗生素液中，容器应保持冰冷。把容器移入超净工作台中，去除PBSA液，将四肢移入另一无菌容器，用含抗生素PBSA洗4遍，每次用20mL。

        (2)把四肢放入无菌平皿中，加入5mL无血清培养液，再向另一个皿中加入5mL无血清培养液，在第一个皿中修剪掉脂肪和骨骼后，把所得肌组织移入第二个皿，切成1mm³左右碎块，移入无菌容器。

        (3)静置5min使组织块沉降，去除培养液，重新加入无血清培养液10mL，用吸管移至25cm²培养瓶。加入胶原酶(2000U/mL)，37 ℃培养24 h。

        (4)强力吹打使组织分散，将悬液移入离心管500g离心5 min。

        (5)去除上清，用含10%胎牛血清和抗生素(不用链霉素)的培养液重新悬浮细胞，高密度条件下接种在培养皿中，从1只鼠获得的细胞足够接种7~8个6 cm平皿。

        (6)将平皿放入塑料盒中，然后置于37℃的培养箱中，每日更换培养液。

操作提示

        由于骨骼肌细胞培养的可重复性较差，并且细胞对外部因素的反应比较敏感，因此应尽量争取在同一批次培养物中进行研究。

结果及鉴定

        培养4~5d后在相差显微镜下可观察到肌细胞呈梭形，有细胞融合现象和自动收缩。原代细胞长满后可传代培养。通过检测肌凝蛋白重链可对细胞作定性分析。

        用同样的方法可以培养平滑肌和心肌细胞。