概述

        脂肪细胞是终末分化细胞，从脂肪组织中分离培养的细胞多被称为“前脂肪细胞”，与脂肪细胞不易鉴别。目前报道的培养成功的前脂肪细胞来源于人、鼠、羊等。
用品

        (1)常规组织块法所需器具及培养器皿。

        (2)F12或DMEM培养基，含20%小牛(或胎牛)血清。

        (3)PBS(pH7.2)。

        (4)胰岛素、地塞米松。

步骤

        (1)切取纯净脂肪组织，用PBS洗涤，剪成0.5~1mm³大小均匀的颗粒,加人适量PBS或培养液，离心1000r/min、10 min。

        (2)取上层纯脂肪颗粒，轻轻地铺在干燥的培养瓶底壁上，静置3~5min，脂肪颗粒黏附牢固后缓慢加入培养液，常规CO₂孵箱内培养，5~7d可见较多短梭形样细胞，更换培养液，继续常规培养。

        (3)单层细胞长满瓶底1/2以上时可传代培养，培养液中加入胰岛素10μg/mL、地塞米松1 μmol/L。

酶消化法也可用于前脂肪细胞原代培养，要点是将切成碎块的脂肪组织用胶原酶消化，3~5层纱布过滤，用密度为1.048~1.075的梯度离心液离心2500r/min,10min，可获得纯化的前脂肪细胞，常规CO₂孵箱内培养。

操作提示

        (1)取材时应仔细剥离尽可能去除血管和脂肪周围的其他结缔组织。

        (2)用明胶或胶原蛋白包被培养皿底壁，有利于脂肪细胞贴壁生长。

结果及鉴定

        获得前脂肪细胞，可能混有脂肪细胞。能分裂增殖的是前脂肪细胞，可以传代培养。

        前脂肪细胞和脂肪细胞有以下共同特点。

        (1)在相差显微镜或光学显微镜下观察，细胞为短梭形、椭圆形或圆形，胞质内含丰富的脂滴。

        (2)油红O染色阳性，并可测得较高脂肪含量。

        (3)细胞内含甘油磷酸脱氢酶(GPDH)。