实验干货｜大鼠脑组织病理取材及包埋技术要点！

借助规范的取材和包埋技术，可以有效保留大鼠脑组织的结构完整性，为后续的病理学研究提供高质量的样本。本文介绍了大鼠脑组织病理取材及包埋技术要点。

01 大鼠脑组织灌注
1. 使用异氟烷对大鼠进行麻醉，随后将大鼠仰卧位固定于鼠板上。
2. 在胸腹部备皮后，沿剑突向下作一横行切口，直至左右腋中线处，并沿两侧腋中线剪开肋骨；通过钝性分离心脏周围的结缔组织，充分暴露心脏。
3. 从心尖搏动最强处插入钝头针，送至主动脉，并夹闭腹主动脉。
4. 先以250mL生理盐水进行快速灌注，随后给予4℃、250mL的4%多聚甲醛进行固定。
5. 灌注完成后，断头取脑，用PBS清洗后，将脑组织放入10%福尔马林中固定48～72小时，之后可移至70%酒精中进行长期保存。

02 脱水包埋前注意事项
1. 标本需新鲜、取材动作应轻缓；固定液至少是样本体积的5倍。
2. 固定前需确定层面及结构，避免浪费组织及寻找不佳（如：海马位于视交叉根部与四叠体之间）。
3. 切片大小一般为1.5×1.5×0.3cm。
4. 切片需平整，防止出现错位导致解剖层面误差。

03 脱水、透明、浸蜡
1. 脱水前，需将固定后的组织取出，使用PBS溶液清洗组织块3次，每次30分钟，以彻底洗去渗入组织内的固定液。
2. 组织依次经过75%乙醇、80%乙醇、90%乙醇、95%乙醇（2次）、无水乙醇（2次）进行脱水处理，随后用二甲苯（2次）进行透明化处理，最后进行石蜡浸蜡。
3. 不同组织的脱水、透明及浸蜡时间存在差异，建议实验人员在实验过程中互相交流经验。在预实验阶段，可尝试使用不同的时间进行HE染色，以评估时间设置的合理性。

04 石蜡包埋
注意调整好组织方向，固定好组织，放于模具中间，进行石蜡包埋。

05 组织评定
1. 浸泡时间不足：蜡块会出现凹陷现象，硬度和脆度不足，难以切出完整的组织。在HE切片中，表现为组织结构不完整，染色对比度明显，核染色质结构模糊不清。
2. 浸泡时间过长：蜡块会变得过硬、过脆，同样难以切出完整的组织。在HE切片中，表现为组织结构不完整、容易脱片，染色的红蓝比例不明显，核结构模糊不清。

06 意外情况处理
1. 脱水不良的组织蜡块：将蜡块放入一个50mL烧杯中，装满液体石蜡，并置于60℃的温箱中使其融化。待组织周围无固体石蜡后，迅速将其放入一个装有正丁醇与松节油（7:3混合）混合液的100mL磨口广口瓶中，封闭后放入60℃温箱中，持续2小时。之后，从混合液中取出组织，重新进入浸蜡过程，每个烧杯均浸泡1小时。
2. 脱水过度：将蜡块粗修后放入冰水中浸泡，或用5mmol/L盐酸水浸泡，或使用氨水等软化剂进行软化。之后，缓慢且仔细地进行切片，切片厚度可比平时稍薄，效果可能会更好。

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