概述

唾液腺细胞培养的主要目的是获得分泌单位的上皮细胞，包括导管上皮细胞、肌上皮细胞和腺泡上皮细胞。在一般培养条件下所获得的细胞是混合在一起的上述多种细胞，如果要得到其中的一种细胞，则需要用细胞克隆技术。常规组织块法培养可获得唾液腺细胞，但立体培养法更能模拟体内情况，现以腮腺细胞立体培养法为例说明唾液腺细胞培养的基本方法。

用品

（1）常规酶消化法原代培养器械和器皿。

（2）24孔培养板、Millicell（圆形微孔膜培养小室，小室直径10mm，膜的微孔直径0.4ɥm）。

（3）Matrigel（人工制备的细胞外基质）原液、0.25%胶原酶、Hanks液。

（4）培养液：DNEM/F12(1:1)，含10%胎牛血清、5ɥg/mL胰岛素，5ɥg/mL转铁蛋白，10ng/mLEGF，100ng/mL氢化可的松，10ng/mL霍乱毒素。

（5）人或动物新鲜腮腺组织。

步骤

（1）用不含血清的培养液将Matrigel原液稀释8倍，每个millicell中加入100ɥL，无菌条件下风吹干，或在无菌条件下自然干燥，然后将millicell置入24孔培养板（每孔一个）。

（2）切取腮腺实质性部分，经Hanks液清洗后剪切成1mm³碎块，按常规酶消化法在0.25%胶原酶中消化，筛网过滤，离心，收集细胞，用培养液制备细胞悬液（2x10⁴/mL）。

（3）在每个millicell中加入0.5mL细胞悬液，millicel孔外24孔培养板孔内加入培养液，使之与millicell孔内液面平齐。

（4）常规培养，24h后更换培养液以后每隔1d更换培养液1次。

操作提示

（1）涎腺上皮细胞培养的关键在于：无血清培养基，低Ca²⁺浓度，以及低胰蛋白酶浓度。

（2）Matrigel包被培养皿底壁有利于涎腺上皮细胞的贴壁生长。

结果及鉴定

按上述方法培养所获得的细胞包括腺泡上皮细胞、导管上皮细胞、肌上皮细胞等。腺泡上皮细胞在培养中为多角形，细胞内含酶原颗粒，表达角蛋白、淀粉酶对氨基水杨酸（PAS）。导管上皮细胞形态为上皮样，不含酶原颗粒，表达角蛋白、前角蛋白、导管上皮膜蛋白和分泌成分（SC）。肌上皮细胞呈星形、三角形或梭形，细胞内含肌丝，表达肌凝蛋白、肌动蛋白和S-100蛋白。有成功传代培养的报道。