实验目的

        建立短周期、可重复的动脉粥样硬化小鼠模型。观察血流扰动对内皮功能、炎症分子表达和斑块形成的影响。该模型也适合做血管功能检测、OilredO染色和内膜RNA分析。

实验原理

        手术结扎左颈总动脉4个远端分支中的3支，即左颈外动脉、左颈内动脉和枕动脉，仅保留甲状腺上动脉通畅。这样可显著降低左侧血流，并在舒张期形成反向血流。结果是局部血流由稳定层流转为异常扰动流。左侧血流量明显下降，右侧变化不明显。

图1.左侧颈总动脉（LCA）部分结扎可导致低且振荡的血流。
        A：左侧颈总动脉的3个分支，即颈外动脉（ECA）、颈内动脉（ICA）和枕动脉（OA）被结扎，仅保留甲状腺上动脉（STA）通畅。
        B：超声多普勒显示血流速度分布，结果表明部分结扎可使左侧颈总动脉在舒张期出现血流反向（箭头所示）。结扎后，右侧颈总动脉（RCA）的血流保持不变。图中图像取自ApoE KO小鼠，可代表至少20只载脂蛋白E缺陷小鼠（ApoE KO）的结果。在C57BL/6J小鼠中进行部分结扎（6只小鼠）也获得了类似的血流反向结果。
        C：部分结扎可降低左侧颈总动脉的血流，而对右侧颈总动脉血流无明显影响。虚线表示结扎前的血流水平。数据以均值±标准误（SE）表示，n=4。

实验动物

        常用6～8周龄ApoEKO小鼠。术前普通饲料自由摄食。若用于动脉粥样硬化造模，术后立即转入Paigen高脂饮食。观察时间可从2天延续到6周。

造模方法

        麻醉采用腹腔注射赛拉嗪10mg/kg和氯胺酮80mg/kg。

        颈前区脱毛、消毒后，于颈部正中做4～5mm切口。钝性分离暴露左颈总动脉。

        随后用6-0丝线结扎左颈外动脉、左颈内动脉和枕动脉，保留甲状腺上动脉。

        关闭切口后置于加热垫恢复。术后12小时皮下注射丁丙诺啡0.1mg/kg镇痛。

模型验证

        血流学验证可用VEVO770高频超声。多普勒检测入口、中段和出口流速，M-mode测血管直径，B-mode测血管长度。造模成功后，左侧在舒张期可见反向血流，整体血流明显下降。右侧基本稳定。

早期变化

        术后2天，内膜中KLF2和eNOS下调，BMP4、ICAM-1和VCAM-1上调。

这说明内皮已经从稳态转向促炎状态。术后7天，左侧血管对乙酰胆碱的舒张反应明显下降，而对SNP的反应无明显差异，提示损伤主要发生在内皮层。

病理结果

图片来源：doi:10.1152/ajpheart.00510.2009.

        术后1周，左侧一般还看不到明确脂质病变。术后2周，可见明显OilredO阳性脂质沉积。术后3周，病变面积进一步增加。右侧颈总动脉在6周内通常无明显病变。若继续延长到4～6周，可见更复杂的进展性斑块。