概述

前列腺细胞培养的关键是改良培养液的成分，加入激素样生长因子可刺激前列腺细胞生长，同时抑制成纤维细胞的生长。人和动物前列腺上皮细胞都有培养成功的报道，下面以大鼠前列腺细胞培养为例介绍培养方法。

用品

（1）10~20周龄大鼠。

（2）37℃水浴槽、离心机、血细胞计数器、6cm培养皿（玻璃或塑料均可）、24孔塑料培养板。

（3）剪刀、注射器、14号导管、50mL锥形离心管。适合于50mL锥形离心管的1mm金属丝筛网和253μm、150μm、100μm、41μm尼龙筛网。

（4）青霉素、卡那霉素、Ⅰ型胶原。

（5）营养培养液WAJC404(MeKeehan等，1984，Ghaproniere等，1986)、MSS(media salt solution )（McKeehan等，1984）胎牛血清或马血清。

（6）霍乱毒素、地塞米松、EGF、羊或鼠催乳激素、胰岛素、前列腺上皮细胞生长因子。

步骤

（1）无菌条件下切取所需前列腺叶放入6cm培养皿，修剪除净脂肪组织称重。

（2）加入2mL浓度为675U/mL的胶原酶，溶剂为MSS，加有100U/mL青霉素和100μg/mL卡那霉素。

（3）剪碎标本，使之可通过14号导管。用注射器和14号导管将剪碎的组织转移到25cm²培养瓶，添加胶原酶，达到每0.1g组织1mL。在37℃振荡水浴箱中培养1h，100g离心5min，收集细胞。

（4）将细胞重新分散在5mL含5%血清的MSS中，依次用253μm、150μm、100μm、41μm尼龙筛过滤，每次过滤后都用5mL含5%血清的MSS冲洗网：离心收集细胞，重新悬浮于WAJC404培养液中，计数，调整细胞密度至4x10⁶/mL。

（5）在24孔培养板的每一孔中接种50μL，含细胞2x10⁵个，每孔加入WA-JC404培养液1mL、霍乱毒素10ng/mL地塞米松1μmol/L、EGF 10ng/mL、催乳素1μg/ml、胰岛素5μg/mL、前列腺上皮细胞生长因子10ng/mL、青霉素100U/mL、卡那霉素100μg/mL。

（6）在37℃、5%C0₂+95%空气条件下培养，第3天，第5天更换培养液，第7天可长满

操作提示

前列腺上皮细胞培养的关键是通过改变培养基的营养成分和激素样生长因子的作用，特异性的维持上皮细胞生长，同时抑制成纤维细胞的过度生长。

结果及鉴定

可获得典型的单层贴壁生长的上皮细胞，可传代培养。用细胞克隆培养法可以从前列腺上皮细胞中分离出具有分泌功能的腺泡上皮细胞和无分泌功能的基底上皮细胞。腺泡上皮细胞高度分化，表达前列腺特异性抗原（PSA）、前列腺酸性磷酸酶、雄激素核受体（AR）、角蛋白8和角蛋白18。基底上皮细胞不表达PSA和AR，而表达P-cadhefn、Bcl2、c-met角蛋白5和角蛋白14。