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分子生物学检测（PCR,甲基化检测）标本收集保存运输方法

更新时间: 2025-01-16 17:13

实验目的：

荧光定量PCR是一种从分子水平上检测DNA或RNA绝对或相对表达量的技术。

甲基化检测用于评估基因启动子区域CG位点的甲基化状态。DNA甲基化能够关闭某些基因的活性，而去甲基化则可以诱导基因的重新活化和表达。

血液标本收集

a. 将血液收集于EDTA抗凝管中，每管至少2ml全血。需使用干冰进行运输。

b. 若使用血清或血浆进行miRNA检测，标本量不得少于500ul，同样需使用干冰运输。
组织标本收集

当从富含降解酶的组织（如胰腺或肠道）中提取RNA或DNA时，建议将组织立即放入液氮中。冰冻的组织块可以直接转移至-80℃储存。一般标本量不少于100mg；对于脂肪或骨头等RNA含量较少的标本，需要200~300mg；植物标本提RNA需要200~300mg，且需要客户提供相关引物信息。组织标本需使用干冰运输。
贴壁细胞标本收集
1. 使用微量移液器将培养瓶/板中的培养液吸除干净，加入1ml 4℃预冷的PBS溶液，轻轻摇晃以洗涤细胞。
2. 再次使用微量移液器将PBS吸除干净。
3. 加入1ml PBS，用细胞刮收集细胞。以3000rpm离心10分钟以收集细胞沉淀，细胞量不少于10⁶个，需使用干冰运输。
悬浮细胞标本收集
1. 取1ml培养液于灭菌的离心管内，以3000rpm离心10分钟，弃去上清液。
2. 重复上述步骤以增加细胞量。
3. 加入1ml 4℃预冷的PBS溶液，轻轻摇晃以洗涤细胞，再次以3000rpm离心10分钟，弃去上清液，使用微量移液器将PBS吸除干净。收集细胞沉淀，细胞量不少于106个，需使用干冰运输。
如果进行RT-PCR，细胞沉淀可加入1ml RNA提取液冷冻后使用干冰运输，离心管用封口膜封好。切忌在细胞标本中加入培养基或PBS后使用干冰运输。
彗星实验标本保存运输方法

实验目的：在单细胞水平检测有核细胞DNA断裂的技术。

活细胞汇合度约70%，装满新鲜培养基，使用不透气培养瓶，封口膜封口，常温运输。后续细胞培养、加药等处理在我司完成后进行检测。
质粒大提标本保存运输方法

实验目的：提取不含内毒素的质粒，用于下游的酶切、转染等实验。

甘油菌50ul，需使用干冰运输。

质粒样品，浓度为20ng/ul，体积为20ul。

注明甘油菌和质粒的抗性。
质粒构建

提供基因序列，上下游是否添加酶切位点，载体质粒名称。
菌种鉴定标本保存方法

实验目的：鉴定未知菌种的种属。

DNA需要浓度为40ng/ul，体积为20ul。A260/280的比值应在1.8左右。

除基因组DNA样本外，仅接受培养过的菌液，体积大于1ml，请确保提供的样本是分离的单菌落，4℃运输。