一、概述

溶酶体是细胞内的一种细胞器，主要负责分解和消化细胞内的生物大分子。它们含有多种酸性水解酶，这些酶在酸性环境中（pH约为4.5-5.0）活性最高，能够分解蛋白质、核酸、多糖等物质。LysoTracker是一种用于活细胞中溶酶体标记的荧光染料，它具有高度的选择性，可以特异性地标记酸性细胞器，由于溶酶体内的pH值远低于中性（大约4.5-5.5），LysoTracker在溶酶体的酸性环境中会完全质子化，从而增强其荧光信号，并滞留在溶酶体内。LysoTracker主要用于活细胞的染色，而不是固定细胞，因为它在活细胞中可以提供最准确的溶酶体标记。

二、实验材料

PBS溶液、溶酶体探针、细胞核染料（Hochest等）、细胞培养相关耗材

三、实验方法

1、工作液的配制：取少量溶酶体探针储备液（通常为1mM）加入到细胞培养液中，使其最终浓度为50-100 nM，混匀后即为溶酶体探针工作液。溶酶体探针工作液使用前可以37℃预温育（可选）。

2、溶酶体的荧光标记：去除细胞培养基，使用1×PBS清洗一次后，加入溶酶体探针工作液，与细胞37℃共孵育30min到2h。注：不同细胞孵育时间不同，建议根据染色效果自行调整。

3、清洗：去除溶酶体探针工作液，使用1×PBS清洗三次后，荧光显微镜下观察。

4、染核：若需要加Hoechst系列复染，推荐使用Hoechst系列的浓度为10 μg/mL，37℃孵育5min后去除染料，1×PBS清洗后再观察。

注意事项：如果染色效果欠佳，可以调整溶酶体探针工作液的浓度，或适当延长染色时间。为了降低染色背景，尽可能的使用较低浓度的染料。注意拍照要迅速，因为染料随着拍照时间的增加易淬灭。溶酶体探针工作液建议现配现用。