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解脲支原体(ureaplasma urealyticum,UU)是女性泌尿生殖道常见的1种支原体,在成年女性生殖道中的定植率为 40%~80%,且妊娠期较高。UU 在临床上与盆腔炎、非淋菌性尿道炎、不孕症、早产、流产及多种新生儿疾病有相关性。UU传播途径,主要依赖性传播,也可通过产道传染,或通过共用毛巾、洗澡用品、游泳池、病人污染的衣物和器械传染等间接传染。另外,宿主状态对 UU 的致病性存在影响。多个性伴侣、性滥、性工作者的U感染率显著高于普通妇女,且性滥者多为UU多个血清型的混合感染。有研究表明,在健康妇女中,UU 主要表现为 UU定量<1X10⁶/m1且UU呈单独阳性,即提示检测出 UU定量<1X10⁶/ml且UU呈单独阳性时,UU属于正常携带状态。当阴道酸性环境遭到破坏,局部抵抗力下降,才会导致生殖系统炎症的发生。UU 感染的致病机制尚不十分明确,目前认为支原体感染人体后,黏附于宿主细胞表面,从宿主细胞膜吸取脂质与胆固醇,引起细胞膜损伤。由于支原体在细胞内繁殖并产生一系列毒性代谢产物,导致T、B淋巴细胞损伤及感染细胞死亡,进而使局部的免疫功能下降,同时尚能逃避宿主免疫防御功能,得到间歇性保护。
治疗方法:解脲支原体对常用四环素类、大环内酯类、喹诺酮类药物表现出不一致的敏感性和耐药性,而且随着抗生素的不断开发和广泛应用,耐药状况也在不断发生变化。并且抗生素胃肠道反应大,对肝功能有一定的影响,依从性差,给治疗带来了很大的困难。因此,中药在治疗此病中越来越显示出独到的功效。
(一)造模机制
国外曾经有学者用解脲支原体接种多种哺乳动物未获成功,因此直到20世纪70年代末,一般均认为由人体分离出来的解脲支原体只能在人体内生存。此后,Furr和Taylor Robineon报道,血中雌激素水平与UU的感染相关。有学者认为,体外注射雌激素的方法成功建立小鼠生殖道 UU感染的模型的机制可能为:①给予大量外源性雌激素可人为造成小鼠假动情期。正常情况小鼠不易感染 UU,只有当小鼠处于动情期时,大量的角化细胞脱落,才有利于 UU的感染。②大量外源性雌激素可使小鼠阴道黏膜糖原分泌量增加,阴道 pH下降,有利于 UU生存。③小鼠和人的阴道菌群有许多差异,小鼠阴道内乳酸杆菌含量低,pH 接近中性。而正常妇女阴道内乳酸杆菌为优势菌,pH偏低。这可能是小鼠阴道不易感染 UU的原因之一。外源性雌激素使小鼠阴道内 pH 降低,增加了 UU的易感性。④雌激素含量增高,宫颈、阴道分泌物增多,营养丰富,阴道内尿素含量增多供给更多的能量,阴道内环境偏酸,抑制了对 UU生长不利的微生物的生长。
(二)造模方法
目前一些成功的造模方法包括:
1.Taylor-Robinson等1989年建立的BALB/c小鼠 在接种前给予皮下注射 0.5mg的雌二醇,隔周1次,共4次。第2次注射后的小鼠,麻醉后用吸液管取50μL解脲支原体悬液注入阴道。接种第7、21、35、42、56天后用棉签拭子取阴道上皮标本,接种于培养基鉴定,同时取生殖器官进行分离培养鉴定。实验结果显示,雌二醇处理的小鼠阴道黏膜的多核白细胞减少或消失,解脲支原体能够定植于经激素处理的小鼠生殖道。Taylor-Robinson等在 2002年的论文中提到3种基因型(TO,CBA,BALB/c)小鼠中,BALB/c 小鼠对于解脲支原体的定植最为敏感,3种血清型(血清5、8、10型)中8型的解脲支原体定植最为成功和持久。这种造模方法在日后的支原体研究中被广泛学习和应用。
2.原上海第二医科大学1994年建立Sprague-dawley 大鼠 麻醉后打开腹腔,膀胱内注射1ml 解脲支原体悬液(1X10⁶UU/ml),关腹,114d后分离膀胱、睾丸等器官进行解脲支原体的培养鉴定。
3.国内有学者用价格低廉的国产昆明小鼠代替 BALB/c小鼠,建立生殖道UU感染模型,节约了实验成本。
(三)生殖道感染UU模型的实验室检测方法
1.肉眼观察 可见外阴红肿,阴道分泌物明显增加,宫颈肥大,宫体充血水肿,子宫增粗、迂曲,横断面切开,部分腔内流出脓性或浆液性渗出物,输卵管积脓、积水,弹性变差,盆腔性肿块及盆腔粘连。
2.形态学检查 UU在固体培养基上菌落很小,15~50μm,光镜下观察多数呈颗粒状,有时呈“油煎蛋”状;在扫描电镜下观察,以球形为主,直径 50~300nm,单个或呈双排列,无细胞壁,细胞膜由3层薄膜构成,小鼠感染 UU后阴道,宫颈鳞状上皮角化明显,子宫内膜组织疏松水肿,微血管充血,宫腔黏膜及黏膜下组织可见炎性细胞浸润。重者可见宫腔内积脓,大量炎细胞浸润。
3.液体培养法 20世纪 90年代,法国生物梅里埃公司生产了支原体IST试剂盒,该试剂盒包括:①)转送培养基瓶;②)尿素-精氨酸肉汤培养基瓶;③1张 16个微孔的药敏试纸条,含多西环素、四环素、交沙素、氧氟沙星、红霉素和原始霉素6种抗生素。可在24~48h内完成Mh和 UU 的培养、鉴定和耐药性检测,取得满意结果。国内外现也广泛应用该试剂盒检测Mh和UU阳性率,已成为临床中最常用的检测方法。
4.免疫学方法 包括抗体检测和抗原检测。
5.分子生物学方法聚合酶链反应(PCR)及DNA探针技术是检测泌尿生殖道支原体敏感性极高的分子生物学方法,具有敏感性、特异性高及省时省力的优点,近年来得到了飞速的发展。