01

CCK8的原理

CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种基于WST-8的高灵敏度试剂盒，广泛用于细胞增殖和细胞毒性检测。它的工作原理是：在电子耦合试剂的存在下，WST-8这一物质会被线粒体脱氢酶还原，生成橙黄色的甲基产物。这个颜色的深浅与细胞的增殖程度成正比，意味着细胞越活跃，颜色越深；而与细胞的毒性成反比，细胞毒性越强，颜色越浅。通过测定颜色变化的程度，CCK-8能快速、精准地反映细胞的生长情况或者药物处理后的细胞存活状态。

02

实验步骤

制备细胞悬液与计数

首先，如果是悬浮细胞，直接离心收集处于对数生长期的细胞；如果是贴壁细胞，则用胰酶消化后再离心收集。把收集到的细胞用含有血清的培养基重悬。接着，拿出血细胞计数板，精确计数细胞数量。为了保证准确性，将细胞稀释至 5×10³ 到 5×10⁴ 个/mL 的单细胞悬液。

图源：小红书

细胞接种

接下来，取96孔板，将细胞悬液以每孔 100 μL 的量接种进去。别忘了设置不同浓度的实验组，每个浓度组最好有 3 到 6 个复孔，并且设置空白组和对照组。为了避免蒸发影响，边缘孔可加入 PBS。这样，实验条件就能更加稳定。

图源：小红书

加药处理与孵育

把接种完细胞的培养板放入 37°C，5% CO₂ 的培养箱中预培养约 24 小时，等细胞贴壁效果良好后，吸出原来的培养基。接着，为每个孔加入不同浓度的待测物质（药物、化学试剂等），再继续放回培养箱孵育。此步骤的孵育时间通常从 6 小时到 96 小时不等。

图源：小红书

CCK-8 孵育

向每个孔加入 10 μL 的 CCK-8 溶液。加入后，轻轻晃动培养板，确保溶液均匀混合（避免溶液沾到孔壁上引起误差）。注意在加样过程中不要产生气泡，这样就能避免影响 OD 值的准确性。然后，将培养板放入培养箱继续孵育 1 到 4 小时，保持在 37°C。

图源：小红书

测定吸光度 (OD) 值

最后，用酶标仪测定每个孔在 450 nm 波长处的吸光度（OD 值）。通过测定 OD 值，可以得到细胞的生长情况或药物处理后的细胞存活率。

图源：小红书

03

数据分析

数据预处理 

在excel中将下机数据预处理。

计算细胞存活率的公式: 

细胞存活率=(实验孔的OD值-空白孔的OD值)/(对照孔的OD值-空白孔的OD值)*100%。

计算细胞抑制率的公式:

细胞抑制率=(空白孔的OD值-实验孔的OD值)/(空白孔的OD值-对照孔的OD值)*100%。

分析作图 

在图表中，纵坐标表示OD值，横坐标表示各时间点。这些数据处理步骤将有助于分析实验结果并得出科学结论。