概述

        多细胞球体是某些细胞系在特定培养条件下形成的具有三维结构的多细胞聚集体，它在形态结构和生物学特性上都与动物和人体实验肿瘤类似。显微镜下观察，多细胞球体组织结构可分为3层，外层约4~6层细胞，由分裂旺盛的细胞紧密相依。内层细胞松散，胞体小。球体中央部分由于乏氧和营养不足形成坏死区域及乏氧细胞层。基于上述特征，多细胞球体为放射和药物研究提供了一种介于单细胞与实体瘤之间的肿瘤实验模型。

用品

        (1)RPMI 1640培养基、胎牛血清、优质琼脂。

        (2)普通培养瓶、旋转培养瓶、培养皿、培养板等。

        (3)CO₂培养箱、旋转培养箱、辐射源等。

步骤

        (1)制备琼脂底层：用PBS(O.01mol/L，pH7.4)配制5%的琼脂溶液，经356.176kPa高压灭菌处理，待冷却至50℃，与等体积并预温40℃的2x无血清RPMl l640培养液迅速混匀，制成2.5%琼脂培养基，趁热浇人培养瓶底部，水平放置，使其自然凝固。琼脂层厚度2~3mm为宜。

        (2)制备细胞悬液：取对数生长期的单层培养肿瘤细胞，用胰蛋白酶消化分散成单个细胞。

        (3)多细胞球体预培养：取5x10⁴个细胞，加入含20%胎牛血清的RPMI 1640培养液8mL，接种于含2.5%琼脂铺底的40mL培养瓶中，放入CO₂孵箱中，在37℃、5%CO₂及饱和湿度条件下培养1~2周。培养期间，视细胞球体生长状况，换新鲜培养液。

        (4)多细胞球体旋转培养：当多细胞球体预培养至160~200μm直径大小，移入250mL旋转培养瓶中，加75mL新鲜培养液，移人旋转培养箱内，在37℃及转速180r/min条件下继续培养，待球体长至300~400 μm大小，可用于各种实验处理。

        (5)电离辐射：根据实验目的，选择一定大小的球体，给予加药处理，在有氢或乏氧条件下X线或y射线照射。

        (6)检测：细胞球体经辐射处理后，用胰蛋白酶消化分散或机械吹打分散成单细胞悬液，然后进行克隆形成试验或四唑盐比色试验。

        (7)绘制细胞存活曲线：根据实验所得各组细胞的存活分数，以剂量为横坐标(算术标尺)，存活分数为纵坐标(对数标尺)绘制细胞存活曲线。