一、概述

平板克隆实验是一种用于检测细胞增殖能力、侵袭性、对杀伤因素敏感性等特性的实验方法。它可以用来评估细胞的群体依赖性和增殖能力。

二、实验材料

PBS溶液、结晶紫、4%多聚甲醛、6孔培养板、细胞培养相关耗材

三、实验方法

1、细胞准备：取对数生长期的细胞，用胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，悬浮在完全培养基中，并进行计数。

2、细胞接种：将细胞接种在6孔板中，根据细胞生长特性，每孔或每皿接种一定数量的细胞，一般是单孔500左右（不同细胞种类大致范围在每孔400-1000个细胞）。

3、培养：将细胞置于37℃、5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养，直到大多数单个克隆中的细胞数大于50。

4、换液：每隔3天进行换液，并观察细胞状态。

5、固定和染色：克隆形成后，用PBS洗涤，然后用4%多聚甲醛固定，接着用结晶紫染液染色。

6、计数和分析：在显微镜下计数克隆形成的数量，计算克隆形成率，公式为：克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）×100%。

注意事项：细胞悬液的制备和接种密度非常关键，细胞需要均匀分散，避免细胞团的形成。 接种密度不能过大，以确保细胞有足够的空间生长。染色完成后，需要将染液清洗干净，避免残留。