一、概述

EdU实验通常指的是使用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）进行的细胞增殖实验。EdU是一种胸腺嘧啶核苷类似物，可以在DNA复制过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中。EdU的乙炔基可以与荧光或生物素标记的叠氮化物发生共价反应，形成稳定的三唑环，从而通过荧光检测到细胞增殖。这种方法常用于细胞增殖、分化、生长与发育、DNA损伤修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面的研究。相比于BrdU，它的分子量更小，且不需要对DNA进行变性处理，操作更加简便高效。

二、实验材料

PBS溶液、EdU检测试剂盒、4%多聚甲醛、Triton X-100、细胞核染料如DAPI、6孔板、细胞培养相关耗材

三、实验方法

1、细胞培养：将细胞接种在6孔培养板上，并培养至对数生长期。

2、EdU标记：在细胞培养基中加入EdU（通常浓度为10μM），并继续培养2-4h，具体时间取决于细胞类型和生长速度。对于增殖速度比较快的细胞，标记时间可以缩短，反之则延长。

3、细胞固定：每孔加入1mL的4%的多聚甲醛固定液固定细胞，通常室温下固定15min，固定后用PBS清洗3次。

4、透膜处理：加入含有Triton X-100的渗透剂处理细胞，以增加细胞膜的通透性，通常室温下处理10-15min，用PBS清洗3次。

5、EDU点击反应：使用点击反应试剂与EDU发生化学反应，形成可检测的荧光信号。点击反应试剂通常是含有Azide基团的染料。

6、细胞核染色：使用DAPI染料对细胞核进行染色，以便在荧光显微镜下观察。

7、荧光显微镜检测：在荧光显微镜下观察并计数EdU阳性细胞，以评估细胞的增殖情况。

8、数据分析：对获得的图像进行分析，计算EdU阳性细胞的比例，从而得到细胞的增殖率。

注意事项：在进行EdU实验时，需要注意避免光敏性的EdU受到光线照射。不同的细胞EdU的使用浓度和孵育时间有所不同，需要预实验摸索条件。