选用12–16周龄雄性C57BL/6小鼠作为实验动物。标准饲料组小鼠饲喂普通啮齿动物饲料（15% kcal来自脂肪）。

肥胖模型组小鼠从6周龄开始饲喂高脂饮食（60% kcal来自脂肪）。

同时，选用C57BL/6背景的Neu3基因敲除小鼠以及野生型小鼠，分别给予普通饲料或高脂饮食喂养。

小鼠按照实验方案饲养6周后进行后续实验处理。

实验动物随机分配至不同饮食及处理组。

所有小鼠均在12小时光照/12小时黑暗循环条件下饲养，自由摄取食物和饮水。

实验操作均在上午9点至中午12点之间完成。

葡萄糖耐量实验

实验前，小鼠禁食16小时。随后腹腔注射葡萄糖：剂量：1.5 g/kg

分别于注射前（0 min）以及注射后20、40、60、90、120 min检测血糖水平。

组织采集

治疗开始35天后，小鼠采用二氧化碳麻醉处死。

随后收集附睾白色脂肪组织、肩胛间棕色脂肪组织、肝脏、脾脏、肺、  肾脏，所有组织称重。

组织学检测

脂肪组织样品切取后立即置于液氮中快速冷冻，并保存于−80℃。

部分组织采用OCT包埋剂进行冷冻包埋，并于−80℃保存。

另一部分组织采用锌固定液固定：

• 0.1%硫酸锌
• 3.8%甲醛

固定2天后，转移至10%蔗糖PBS溶液中继续处理，每次处理2天。固定后的组织保存于70%乙醇中，随后进行常规石蜡包埋，并切制5 μm厚组织切片。

肝脏脂肪变性检测

为了评价肝细胞内脂质累积情况，对OCT包埋的未固定肝组织冷冻切片进行油红O染色，用于检测肝组织中的中性脂质沉积。同时，对石蜡包埋肝组织切片进行HE染色，用于观察肝细胞形态变化、脂肪变性程度、炎症反应、纤维化表现

模型评价指标

1. 肝脏大体形态观察

建模后，通过观察肝脏外观变化，对模型状态进行初步评价。

正常情况下，小鼠肝脏颜色较深，表面光滑，质地均匀。

高脂饮食诱导后，模型组肝脏通常表现为肝脏体积增加、颜色变浅、脂质沉积增加。

2. HE染色分析肝组织病理变化

通过HE染色可以观察：肝细胞形态变化、脂肪空泡形成、炎症细胞浸润、组织结构异常。

正常肝组织中，肝细胞排列规则，细胞结构完整。NAFLD模型组中可出现明显脂肪变性：肝细胞内大量空泡形成、细胞体积增大、脂滴聚集增加。

3. 油红O染色检测肝脏脂质沉积

对照组：

肝组织中红色脂滴较少，脂质沉积水平较低。

模型组：

肝细胞内出现大量红色脂滴聚集，脂质面积明显增加。

油红O染色能够直接反映肝组织脂肪沉积情况，是NAFLD动物模型评价的重要指标之一。