一、背景

用于石蜡切片的肺标本有两个关键要求：肺叶完整性与适当灌流处理。肺组织内常存在空气与血液残留，在制作病理石蜡切片时容易导致结构塌陷或染色失败。

因此，在固定与脱水包埋前，必须尽量将肺内气体与血液置换出来，使组织充分灌流。传统方法通常依赖真空抽吸设备，但操作复杂且耗时。本章介绍一种更简便、有效的小鼠肺组织采集与灌流方法。

二、解剖基础

小鼠呼吸系统包括气管、支气管及肺组织，肺分为左肺1叶、右肺4叶。肺主要由肺泡及支气管结构组成。

三、器械与耗材

皮肤剪、眼科剪、止血钳
10 mL注射器
三通接口
生理盐水（PBS或生理盐水）
固定针或注射针
解剖板及固定器具

四、操作方法（小鼠肺采集及处理流程）

（1）开胸与暴露气管

1. 小鼠麻醉后固定于解剖板上。
2. 打开胸腔，暴露心肺结构。
3. 去除胸前组织（胸骨及胸腺等），充分暴露气管与肺。
4. 小心分离气管周围组织，避免损伤气管。

（2）气管插管与准备灌流

1. 剪开气管远端，向近端方向分离。
2. 将气管完整暴露，准备插管。
3. 用注射针或插管连接三通装置，并固定气管。
4. 确保气管连接紧密，不漏气。

（3）建立灌流通路

1. 向注射器中加入生理盐水约5 mL。
2. 将注射器连接三通阀。
3. 缓慢推注生理盐水，使液体进入肺循环。
4. 同时观察肺部逐渐由红色变为灰白色，提示灌流完成、血液基本排空。

（4）排气与灌流控制

1. 关闭三通阀，观察气体排出情况。
2. 调整注射器方向，确保液体顺畅进入肺组织。
3. 继续缓慢推注，使肺内残余血液及气体充分置换。
4. 直至肺组织颜色均匀变白，无明显血液残留。

（5）完全灌流与收尾处理

1. 放松注射器，使其自动回抽，观察回流情况。
2. 重复灌流1–2次，确保组织完全置换。
3. 若仍有局部未灌流区域，可再次轻柔推注直至均匀。
4. 灌流完成后，关闭气管并进行组织固定准备。
5. 取出完整肺组织，置于固定液中保存，避免组织回缩或塌陷。

要点总结

• 灌流过程中应保持低压缓慢推注，避免肺泡破裂
• 灌流液体量不足会导致置换不完全
• 灌流过快或压力过高会造成组织损伤或漏液

操作讨论

1. 灌流盐水量不宜过多，以免抽吸时负压不足影响结构完整性。
2. 灌流盐水量也不宜过少，必须确保肺组织完全被液体置换。