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哮喘动物模型造模方法分享

更新时间: 2026-05-18 09:29

过敏性哮喘是哮喘研究的常见模型，能够模拟由外源性过敏原诱导的气道炎症、嗜酸性粒细胞浸润、IgE升高、Th2免疫反应增强和黏液分泌增加等病理特征。过敏性哮喘模型的造模一般包括两个核心步骤：致敏和激发。

致敏阶段主要是让动物免疫系统识别过敏原，并产生特异性免疫反应；激发阶段则是让已经致敏的动物再次接触相同过敏原，从而诱发气道炎症反应。常用致敏原包括OVA、HDM、花粉、真菌提取物等。

哮喘模型造模方法

小鼠在第0天、第7天和第14天进行腹腔注射致敏。

20μg过敏原+1.25mgAl(OH)3佐剂。

在第21天，小鼠经腹腔注射Avertin麻醉后，进行一次气管内直接注射激发。

每只小鼠气管内注射：

40μg对应过敏原。

这里用直接气管内注射法，该方法的优点是抗原进入肺部的剂量更可控，模型一致性高；缺点是侵入性更强，和自然吸入暴露还有距离。

在第23天处死小鼠取样，也就是气管内激发后约48小时进行检测。

每组12只小鼠被分成两部分：

一部分小鼠用于采集血液和肺组织，检测肺重/体重比、血浆总IgE、外周血嗜酸性粒细胞比例、HE染色、PAS染色、肺组织qRT-PCR和转录组分析。

另一部分小鼠用于采集血液、BALF和肺组织，检测血浆总IgE、外周血嗜酸性粒细胞比例、BALF总细胞数、BALF嗜酸性粒细胞数、BALF中IL-5水平和肺组织qRT-PCR。

模型鉴定指标

①检测肺重/体重比。肺重/体重比升高提示肺部炎症和组织水肿更明显。

②外周血嗜酸性粒细胞比例。外周血嗜酸性粒细胞比例升高说明过敏原不仅诱导局部气道炎症，也能引发系统性嗜酸性粒细胞反应。

支气管肺泡灌洗液是判断哮喘模型是否成功的重要样本。使用0.8ml无菌生理盐水进行肺泡灌洗液采集，然后检测总细胞数、嗜酸性粒细胞数和IL-5水平。

结果显示，模型组总细胞数明显增加，嗜酸性粒细胞大量浸润，IL-5水平升高。

HE染色观察气道和血管周围炎症细胞浸润，采用PAS染色观察气道黏液分泌。

HE染色结果显示，小鼠支气管周围和血管周围有明显炎症细胞浸润，尤其是嗜酸性粒细胞聚集。

PAS染色结果显示，气道上皮杯状细胞和气道腔内出现明显PAS阳性信号，提示黏液高分泌。

血浆IgE是过敏反应指标。组血浆IgE升高说明抗原均能完成系统性致敏。

但是，仅有IgE升高不等于模型足够强。真正拉开差距的是后续气道炎症。

过敏源引起差异表达基因，并共同富集到趋化因子活性、趋化因子受体结合、细胞因子活性、中性粒细胞趋化等通路。