细胞活死染色是区分活细胞与死细胞、评价细胞毒性及观察材料生物相容性的常用技术。该方法利用细胞膜完整性和胞内酶活性的差异，通过不同荧光信号呈现细胞存活状态。针对操作条件较多、实验结果容易受到细节影响等特点，潮新生物建立了从方案沟通、样本处理到成像交付的流程化服务体系。

一、实验原理

实验通常采用Calcein AM与PI联合染色。Calcein AM可进入活细胞，并在胞内酯酶作用下转化为能够发出绿色荧光的Calcein；PI通常不能进入细胞膜完整的活细胞，但可以进入膜受损或死亡细胞，与细胞内核酸结合后产生红色荧光。潮新生物会结合细胞类型、培养方式和研究目的，对染液浓度及孵育条件进行合理设置。

二、实验材料

常用实验材料包括PBS缓冲液、Calcein AM/PI染液、细胞培养相关耗材及荧光观察设备。4%多聚甲醛可根据后续检测需求选用，但一般不建议在染色前固定，以免改变细胞膜状态，影响实验结果判断。潮新生物在实验启动前核对样本信息、分组数量和观察指标，减少前期沟通偏差。

三、标准化实验流程

潮新生物首先根据贴壁细胞或悬浮细胞的特性完成培养和收集，并控制适宜的细胞密度；随后去除培养基，使用PBS轻柔洗涤1—2次。按照试剂说明配制染色工作液后，将染液均匀覆盖细胞，在室温条件下避光孵育约20分钟。

孵育结束后，潮新生物去除多余染液并进行荧光观察。正常情况下，活细胞呈现绿色荧光，死细胞呈现红色荧光。具体孵育时间和观察参数需要根据细胞类型、样本状态及试剂说明进行调整。

四、规范化数据交付

细胞密度、染液浓度、孵育时间、洗涤方式和拍摄参数均可能影响细胞活死染色结果。潮新生物对实验关键步骤进行记录，并按照实验分组整理原始图像和基础数据。

通过专业化方案设计、流程化实验执行与规范化资料归档，潮新生物为科研人员提供便于比较、分析和后续使用的实验结果。潮新生物也将持续优化细胞活死染色服务细节，为细胞研究项目提供有序、清晰的实验支持。