概述

下面以常用的格栅培养法（网状支架培养法）为例介绍器官培养的步骤和操作要求。

用品

除一般细胞培养用品外还需以下器材。

（1）不锈钢筛网（用做支架）。

（2）0.5 μm 微孔滤膜。

（3）器官培养的培养皿。

（4）如有条件建立三气道培养箱可以实现对培养环境中CO₂、O₂,浓度分别进行精确控制，可以极大地方便器官组织的体外培养。

步骤

（1）将不锈钢筛网做成支架形状(如凸型)，其高度为4mm或调整至培养皿的1/2深度平面，在其表面放置0.5μm孔径滤膜。

（2）将培养液加人培养皿，使液面刚刚接触到滤膜，但又不会使其浮起。

（3）将要培养器官组织放在滤膜上，一般厚度不要超过200~1000μm，水平面积不超过 10 mm²，如组织为肝、肾等，体积不能大于1mm³

（4）将上述准备好的培养物放入CO₂培养箱，并加注氧气调整氧分压，必要时可以调到 90%。

（5）培养过程中要注意观察培养液平面，尽可能保持在与滤膜一致的水平上。

（6）上述方法可进行器官培养1~3周，每3~5d换液1次，并根据情况做进一步实验和检测。

（7）培养完成的器官组织小块，可以取下直接进行石蜡包埋或冷冻切片或连同微孔滤膜一起进行组织学研究，也可以继续培养，或进行体内移植试验。

操作提示

器官培养对于成体组织器官培养一定要保持较高氧分压，可达到90%；对于胚胎组织器官或肿瘤组织可以适当降低氧分压，达到45%，尽量避免组织器官中心部位发生缺氧坏死。培养皿中加培养液一定要浸没组织器官高度的1/2，以保证营养物质交换。不同的器官培养，尚需一些特殊的条件，如某些生长因子、激素等，可参考相应文献。