概述

这种方法采用前述的组织消化分散法，将细胞间质包括基质、纤维等去除使细胞分散，可以很快得到大量活细胞，从而很方便的接种培养瓶进行快速培养，细胞可在短时间内生长成片。本方法适用于培养大量组织，原代细胞产量高;但步骤烦琐、容易污染，一些消化酶价格昂贵，实验成本高。

用品

消化法的用品和与前述的组织分离消化法基本相同。

步骤

（1）按消化分离法收获细胞。

（2）在消化过程中，可随时吸取少量消化液在镜下观察，如发现组织已分散成细胞团或单个细胞，则终止消化。通过孔径200目的网过滤掉残留的较大组织块。大组织块可加新的消化液后继续消化。

（3）已过滤的消化液800~1000r/min低速离心5min后，去除上清，加含血清培养液终止酶消化作用，轻轻吹打形成细胞悬液。如果用胶原酶或EDTA消化液等，尚需用Hanks液或无血清培养液洗1~2次后再加培养液重悬，细胞计数后、接种培养瓶，置CO₂培养箱培养。某些特殊类型细胞如内皮细胞、骨细胞等需用特殊的消化手段和步骤进行，将在正常细胞培养章节中叙述。对悬浮生长的细胞如白血病细胞、骨髓细胞和胸水、腹水等含有的癌细胞可不经消化直接离心分离收集，或经淋巴细胞分离液等梯度离心分离后，直接接种进行原代培养。

操作提示

采用消化分散法进行原代培养，一定要根据组织类型选择适宜的消化酶，尤其是注意选择适当类型的胶原酶。应当控制消化时间，避免消化过渡，造成细胞膜损伤，从而影响细胞贴壁及生长。首次进行原代培养时，适当提高接种细胞密度，有助于提高培养成活率。