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技术服务
高质量的数据和快速的周转期以支持各项药物开发、临床前研究和临床研究
一、概述
脂质体转染是一种常用的非病毒基因转染技术,其基本原理是利用带正电的脂质体与带负电的核酸(DNA或RNA)通过静电作用形成复合物,这些复合物可以通过细胞膜的融合或内吞作用进入细胞内部,实现基因的转染。
二、实验材料
PBS溶液、脂质体、携带目的基因脂质体、细胞培养相关耗材
三、实验方法
1、准备脂质体和DNA/RNA:选择适合的脂质体配方,并按照生产商的说明书进行配制。同时,准备需要转染的质粒DNA或RNA。
2、混合脂质体和核酸:将脂质体与核酸在无血清的培养基中混合,通常还需要加入一定量的正电荷分子(如聚乙烯亚胺PEI)以促进脂质体与核酸的结合。
3、孵育:将混合好的脂质体和核酸孵育一段时间,以形成脂质体-核酸复合物。
4、添加到细胞:将脂质体-核酸复合物添加到待转染的细胞培养液中,并继续培养。
5、检测表达:在转染后一定时间(通常为24-72小时),通过PCR、Western blot、免疫荧光染色或流式细胞术等方法检测目标基因或蛋白的表达情况。
注意事项:不同细胞使用浓度不同。