一、概述

细胞金属离子的检测是细胞生物学研究中的一个重要领域，它可以帮助我们了解金属离子在细胞内的功能和动态变化。金属离子在生物体内扮演着多种角色，包括参与酶的活性、信号传导、细胞骨架的构建等。检测细胞内金属离子的方法有多种，有荧光探针法，电化学法，化学沉淀等方法。例如，FerroOrange和FeRhoNox-1是两种常用的检测细胞内亚铁离子(Fe²⁺)的荧光探针，下文以FeRhoNox-1荧光探针检测为例展述Fe²⁺检测步骤。

二、实验材料

PBS溶液、FeRhoNox-1、DMSO、细胞培养相关耗材

三、实验方法

1、探针准备：从冰箱取出FeRhoNox-1，置于室温至少30min，低速离心，使粉末离心到管底。将FeRhoNox-1加入DMSO中，使用枪反复吹吸，直至完全溶解，制备成1mM的储存液。在实验前，将储存液用PBS稀释至工作浓度（如5uM）。

2、细胞染色：将细胞与FeRhoNox-1孵育30min至1h，然后用PBS洗涤两到三次。在荧光显微镜下观察图像或通过流式细胞术分析来确定二价铁的水平。

3、荧光检测：对于荧光激发，使用绿色激发滤片，如Cy3检测用的滤片。对于激光激发，532nm或543nm激光器比较适合，发射波长为570nm左右，可以观察到橙红色荧光。

注意事项：避免使用酸性溶液，因为它们可能会氧化探针，影响检测效率。操作过程中注意避光，以防止荧光淬灭。