一、概述

细胞侵袭实验的原理基于细胞迁移和侵袭的自然生物学过程，这些过程在许多生理和病理条件下都非常重要，尤其是在癌症转移中。实验通常使用Transwell小室和基质胶涂层来模拟细胞外基质（ECM）的屏障，评估细胞的侵袭能力。基质胶（如Matrigel）是一种模拟细胞外基质的蛋白质混合物，主要由层粘连蛋白、胶原蛋白和肝素硫酸盐组成。在实验中，基质胶涂覆在Transwell小室的聚碳酸酯膜上，形成一道屏障，模拟细胞在体内遇到的细胞外基质。在实验中，细胞被种植在基质胶涂层的上室，下室通常含有含有血清的培养基作为化学吸引剂。在实验过程中，细胞会尝试穿越基质胶层，这个过程涉及到细胞的粘附、迁移、蛋白酶的分泌以及细胞外基质的降解。

二、实验材料

PBS溶液、Transwell小室、基质胶Matrigel、血清、胰蛋白酶、4%多聚甲醛、结晶紫、细胞培养相关耗材

三、实验方法

1、制备细胞悬液：用胰蛋白酶处理细胞，使其从培养皿上脱落。离心收集细胞，并用无血清培养基重悬细胞，计数细胞，并调整细胞浓度至适当的密度。

2、制备基质胶涂层：将Matrigel与无血清培养基按一定比例混合（如1:5或1:8），根据实验需要进行稀释。将混合好的基质胶加入Transwell小室的上室，形成一层薄薄的基质胶涂层。 将小室放入含有37°C、5% CO2的细胞培养箱中，让基质胶固化30min至1h。

3、接种细胞：将细胞悬液加入Transwell上室的基质胶涂层上。在下室中加入适量的含有血清的培养基。

4、培养细胞：将Transwell小室放入含有下室培养基的培养皿中。将整个培养皿放入37°C、5% CO2的细胞培养箱中培养，培养时间根据实验需要而定，通常为24-48h。

5、固定和染色：取出Transwell小室，用PBS洗涤去除未侵袭的细胞。使用4%多聚甲醛固定细胞。用结晶紫对细胞进行染色。

6、清除基质胶：使用细胞刮刀或棉签轻轻清除上室中的基质胶。

7、计数侵袭细胞：在显微镜下观察下室的细胞。随机选择几个视野，计数侵袭到下室的细胞数量。对侵袭细胞进行拍照记录，用于报告或进一步分析。

8、数据分析：计算每个视野中侵袭细胞的平均数。根据实验组和对照组的细胞数，进行统计分析。

注意事项：细胞悬液的浓度不宜过高，以免细胞在上室中形成多细胞层，影响实验结果。基质胶的厚度和浓度会影响细胞的侵袭能力，需要根据实验目的进行优化。实验过程中要避免干燥，以保持基质胶的完整性。实验操作要轻柔，避免对细胞造成不必要的损伤。