概述

        骨髓中的前体血细胞在培养液中混悬生长，成熟的血细胞短期内即死亡，而前体血细胞可长期培养生长并能传代。

用品

        (1)Fischer培养液，添加50 U/mL青霉素、50μgmL链霉素、6 mmol/L NaHCO₃(1.32g /L)

        (2)促生长培养液:每100mL上述培养液中加人10^-6mol/L丁二酸氢化可的松钠，20%马血清。

        (3)小鼠5只。

        (4)1mL注射器、21号针头、纱布、棉签、剪刀、血管钳、25 cm²培养瓶。

步骤

        (1)脱颈法处死小鼠，70%乙醇浸湿消毒，切取股骨，移入冰浴冷却的含Fis-cher培养液的培养皿中，每块股骨的骨髓中约含(1.5~2.0)x10⁷个有核细胞。

        (2)去除骨周围的肌组织，用血管钳固定股骨，切除胫骨端，将21号针头插入，切除股骨的另一端，将断端置人含100mL培养液的瓶中，用注射器反复抽吸吹打，使骨髓全部进入培养液中。

        (3)用10mL移液器反复吹打使骨髓混悬在培养液中，给每个25cm²培养瓶中移入10mL骨髓混悬液，轻轻摇动，使混悬液分布均匀，33℃，5%CO₂，条件下培养。

        (4)每周更换培养液1次，每次换液时轻轻摇动培养瓶，用移液器移出5mL培养液及其中未贴壁的细胞，然后再加入5mL新鲜培养液，继续培养。人骨髓细胞培养时可抽取髂骨骨髓，采用类似的方法培养，所得到的细胞可用于形态学等方面的研究;也可用各种不同的生长因子处理，用软琼脂培养法获得各种不同的克隆细胞株。

操作提示

        从骨髓获取的细胞是含有多种细胞种类的混合细胞群，可在不同的培养条件下获得各种不同的克隆细胞株。