视网膜色素变性(RP)是一组视网膜进行性营养不良性退行病变，大部分是遗传性疾病。病理过程首先是视杆细胞的损害，其后是视锥细胞亦受到损害。感光细胞的损害主要是通过凋亡进行的，细胞神经营养因子的缺乏是凋亡发生的一个重要原因。RP的实质是基因缺陷导致的感光细胞及视网膜色素上皮的变性，从而引起夜盲、进行性视野缩小、视力下降、眼底特征性改变及视网膜电图波形振幅减低或熄灭。RP是发达国家最主要的致盲原因之一。根据世界各地的调查资料，全球人口群体患病率为1/500

(一)造模机制         糖尿病性白内障占糖尿病患者的60%~65%，是糖尿病并发症首要的致盲因素。采用链脲佐菌素(streptozotocin，STZ)诱导 SD(Sprague-Dawley)大鼠建立糖尿病及糖尿病性白内障动物模型，对于开展糖尿病性白内障研究，掌握白内障确切的形成时间，进程，进而采取药物干预延缓白内障的发生、减轻白内障的程度，具有十分重要的研究和临床意义。其中，建立糖尿病动物模型是糖尿病性白内障动物模型的基础。 (二)造模方法  

(一)造模机制         糖尿病性视网膜病变是糖尿病的微血管并发症之一。其主要病理表现有两个方面：①神经病理方面的改变，持续的高血糖状态使视神经纤维发生退行性改变，髓鞘结构受损，神经胶质纤维增生等病理改变；②微血管病理方面的改变，主要表现为视网膜毛细血管周细胞丧失，致使毛细血管内皮细胞增生，基膜增，继而引起血液动力学的改变、血管管腔的狭窄，甚至闭寒和新生血管生成等一系列病理变化。利用遗传、诱发或转基因等方式培育糖尿病动物模型，进行视网膜病变发生发展过程形态学改

(一)模型概述        痤疮为常见的皮脂腺疾病，其发病率高，约90%以上青春期男女可有程度不等的痤疮发生。该病主要发生在面部，使皮肤受到不同程度的损害。就疮产生的原因而言，痤疮是侵犯毛囊皮脂腺单元的一种疾病，在正常的代谢过程中，毛囊皮脂腺导管上皮细胞脱屑，皮脂腺分泌皮脂，皮脂携带脱屑从毛囊口排除，其中毛囊可以寄生大量的皮肤正常菌群，如痤疮丙酸杆菌、需氧葡萄球菌等。不正常的因素导致的性激素紊乱和皮脂腺痤疮丙酸杆菌的大量繁殖、皮脂腺导管的异常角化、皮脂的大量分泌导

(一)造模机制         银屑病(psoriasis)俗称牛皮癣，是一种临床上常见的慢性、复发性、炎症性皮肤病，我国银屑病的患病率为0.123%。近年来，每年至少增加10万病例，且发病率有不断升高的趋势。银屑病因皮肤外观感觉差，瘙痒重，可以严重影响患者的生活质量。有关银屑病的病因及发病机制，虽然近年来国内外进行了大量的研究工作，但至今尚未完全阐明，一般认为与遗传因素、感染、代谢障碍、免疫功能紊乱、精神因素、其他等因素有关。银屑病是遗传与环境等多种因素相互作用的

        在ES细胞的培养过程中，培养基如DMEM 只能满足细胞最基本的营养需要要使ES细胞既能无限增殖又不呈现分化趋势，则必须在基础培养基中添加一些成分。常见的有血清、2-巯基乙醇、丙酮酸钠以及氨基酸和细胞因子等，在这些添加成分中对ES细胞生长及抑制分化影响较大的为血清和细胞因子。 一、血清         血清质量的好坏最直接影响到ES细胞的培养，使用优质血清ES细胞的克降率能达20%以上。值得注意的是在ES细胞分离

        目前ES细胞的培养多采用DMEM适合于生长速度快、贴壁性差的细胞培养。一般来说早期胚胎的培养以高糖DMEM更适宜;而ES细胞的培养传代过程中对葡萄糖含量的要求则相对较低，可用低糖DMEM。除DMEM培养基外，在ES细胞的分离培养中也有人采用TCM-199和F12等。TCM-199是根据哺乳动物细胞的特点改良的199液，适合于多种哺乳动物细胞的培养;F12培养基比较适合单细胞和克隆化细胞的培养，在ES细胞的分离培养中经常与DMEM 联合使用。上述是指在

        目前，胚胎干细胞的研究已经取得很大的进展，但是迄今为止仅从小鼠获得真正意义的胚胎干细胞，即具有参与生殖系传递能力的胚胎干细胞。这说明在其他动物及人类胚胎干细胞研究方面还存在未知的影响因素，笼统说来包括饲养层、培养基、添加物、胚胎日龄、遗传背景以及获取原始生殖细胞的时间等因素。 一、饲养层         所谓饲养层(滋养层)就是指一些特定细胞(如颗粒细胞、成纤维细胞、输卵管上皮细胞等易在体外培养的细胞)，经有丝

        离散后的ICM 在饲养层上有足够满足其生长增殖需要的培养基存在情况下，小鼠一般23d就会形成一个ES细胞集落这就要求定时传代，否则ES细胞就会分化和变异。传代时应挑取充分增殖而又未分化的集落，用消化液同时辅以玻璃针剥离，使其又一次离散接种于新鲜饲养层上。ES细胞具有无限增殖传代的特性但由于培养条件的不完善或其他可能原因，目前，除小鼠外其他动物的ES细胞都较难无限传代下去。目前发现ES细胞各代之间，随代数的增加克隆数存在一定的递减穎规律，这也是限制ES

一、获取早期胚胎         不同动物获取早期胚胎的时间不同主要考虑以下方面因素。         (1)取胚胎在条件允许的情况下，细胞尽可能地多。         (2)在体外易于培养增殖并能保持多能性，小鼠一般取2.5~3.5d桑葚胚或囊胚;猪取9~10d囊胚;绵羊取7~8d囊胚或孵化胚;牛取6~7d桑甚胚;水貂取6~7d桑葚胚或囊胚;人取7~8d囊胚。除从动物体内直接获取新鲜胚