一、实验原理

免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，简称Co-IP）是一种用于研究蛋白质之间相互作用的经典实验方法。 免疫共沉淀是基于抗体和抗原之间的特异性相互作用。在非变性条件下裂解细胞，细胞内许多蛋白质-蛋白质之间的相互作用被保留。使用特定抗体与目标蛋白（诱饵蛋白）结合，能够将与其相互作用的蛋白质（靶蛋白）一同沉淀下来。随后，通过Western Blot等手段检测沉淀中的靶蛋白，从而验证两者之间的相互作用。

二、实验流程

1、细胞裂解：使用非变性剂（如RIPA缓冲液）裂解细胞，以保持蛋白质之间的相互作用。

2、预清除裂解物（可选）：向裂解物中加入protein A或protein G，以去除非特异性结合的杂质。

3、免疫沉淀：将特定抗体与琼脂糖珠或磁珠结合，加入细胞裂解物中，使抗体与目标蛋白结合并沉淀。

4、洗涤：洗涤沉淀，去除未结合的蛋白质和杂质。

5、蛋白质释放：将沉淀中的蛋白质从珠子上释放出来。

6、Western Blot检测：通过Western Blot等方法检测沉淀中的靶蛋白。

三、送样要求

1、IP级别的抗体；需要研究的蛋白互作信息（蛋白名称、大小、种属等）

2、实验样本：组织样品>200 mg，细胞样品>2×107 ，蛋白样品大于2 ml；

四、注意事项

抗体选择：选择特异性强、亲和力高的抗体，以避免非特异性结合。

实验条件：保持实验条件一致，避免温度、pH等因素影响实验结果。

对照设置：设置适当的阴性对照和阳性对照，以验证实验的有效性。

酶抑制剂：在裂解过程中添加蛋白酶抑制剂，防止蛋白质降解。

洗涤：洗涤要充分，以去除非特异性结合的蛋白质。

记录：详细记录实验过程，包括试剂批次、实验条件等，以便后续数据分析。

通过遵循这些实验原理、流程和注意事项，可以有效地进行免疫共沉淀实验，以研究蛋白质之间的相互作用。