概述

        脂肪源性干细胞(adipose derivedstem cells，ADSCs)是从脂肪组织中分离出来的具有多向分化潜能的成体干细胞。Zuk等首先发现ADSCs具有多向分化的能力，与BMMSCs有相似的生物学形状和免疫学表型，能分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、血管内皮、肝、胰、神经等细胞类型，然而，与BMMSCs相比，ADSCs具有容易获得、易扩增、不宜衰老并且无伦理学问题等特点，在细胞或基因治疗中发挥重要作用，目前已成为干细胞研究的热点之一。

用品

        (1)DMEM/F12培养基(含10%胎牛血清，100U/ml青、链霉素)，低糖DMEM培养基，成脂肪细胞诱导液(AI)：高糖DMEM培养基，10% FBS 100 U/ml 青、链霉素，1 μmol/L Dex,0.15mmol/L IBMX，200μmol吲哚美辛，10μg/mL胰岛素;成脂肪细胞保持液(AM)：高糖DMEM培养基，10%FBS，100U/ml青、链霉素，10μg/mL胰岛素;0.2mmolL谷氨酰胺，D-Hanks 液。

        (2)PBS缓冲液，胶原酶，胰蛋白酶。

        (3)常规原代细胞培养器具。

步骤

        (1)4周龄雄性SD大鼠，处死,70%乙醇消毒5~10min。无菌条件下切开腹股沟皮肤，暴露腹股沟脂肪垫，切取约4g脂肪组织，去除肉眼可见的筋膜组织及小血管，将脂肪垫剪碎，将浆状脂肪组织放入三角烧瓶中。

        (2)加入等体积的0.1% I型胶原酶溶液，37℃水浴振荡器孵育约1h，直至细胞混合物成乳状浓稠液体。

        (3)1200r/min离心5min，弃上层漂浮物及上清，用含10%胎牛血清和1%双抗的DMEM/F12培养基重悬，200目网过滤，1000r/min离心5min，弃上清PBS离心洗涤1次。

        (4)用含10% FBS的DMEM/F12培养基重悬，接种于25cm²培养瓶，在37℃、5%CO₂饱和湿度孵箱培养，3d后首次换液，取出未贴壁细胞、脂滴及残渣。3d换液，细胞汇合达80%~90%时0.25%胰蛋白酶消化，按1：2或1：3比例首次传代。

操作提示

        (1)取材时应仔细剥离去除血管和筋膜组织。

        (2)用明胶或胶原蛋白处理培养皿底壁，有利于细胞的贴壁生长。

结果及鉴定

        (1)形态学观察：在培养初期，脂肪源性干细胞的形态类似成纤维细胞，贴壁牢，不易消化。

        (2)迄今为止，仍未发现ADSCs的特征性标志分子。现有研究表明ADSCs一般表达CD29、CD44、CD105和BMMSCs表面分子STRO-1，不表达CD34、CD45HLA -DR。

        (3)诱导分化实验：在特定的诱导条件下，脂肪源性干细胞可以分化成为成骨细胞、软骨细胞、神经细胞、上皮细胞、脂肪细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞等多种细胞。