一、概述

成骨细胞在医学和材料科学领域有着广泛的应用，是骨组织工程的关键细胞类型，另外成骨细胞在纳米生物材料等方向也有重要的应用。成骨细胞的获取有多种途径，常见的方法有：原代提取，骨髓间充质干细胞（BMSC）诱导分化成骨细胞。

二、实验材料

1、手术器械，培养耗材，PBS，0.25%胰蛋白酶，DMEM完全培养基

2、成骨诱导培养基（成骨诱导液）

三、实验方法

原代分离成骨细胞

1、颅骨分离：将新生一周的小鼠处死，取出颅盖骨，放入预冷PBS，剔除其上附着的结缔组织，之后再用PBS清洗3次，放入盛有DMEM培养基的培养皿中，剪成0.5mm左右大小的碎块。

2、胰酶消化：加入胰蛋白酶4mL，将其放入培养箱中消化20min，之后加入血清中止消化，弃掉上清液，加入1.0g/L的I型胶原酶10mL，于培养箱中消化60min。

3、细胞培养：取上清，在1000rpm转速下离心5min，弃掉上清液，DMEM完全培养基重悬细胞，接种于培养瓶中，于37°C，5%CO2培养箱中培养，48h后换液，之后每2天换一次液，直至细胞融合度为90%左右，即可传代。

骨髓间充质干细胞（BMSC）诱导成骨细胞

1、细胞接种：将BMSC（BMSC的原代获取方法详见于间充质干细胞专栏）按照105/mL的浓度接种于6孔板上。

2、诱导分化：加入成骨诱导培养基，每2-3天换一次液，大约21天后可以进行茜素红钙结节染色鉴定。