一、概述

骨细胞（Osteocytes）骨基质内唯一的细胞，属于终末分化细胞，也是骨组织中数目最多的细胞，大概是成骨细胞的10倍以上，在骨生长和骨重塑过程中的组织适应上起重要作用。骨组织表层主要是成骨细胞，而骨片内层中骨细胞的数量远大于成骨细胞。骨细胞从成骨细胞分化而来，但也可向成骨细胞转化，骨细胞与成骨细胞有许多相同的细胞标志物，不同的是所表达标志物的水平并不相同。比如骨细胞表达的ALP的水平远远低于成骨细胞，而其BGP的表达水平要高于成骨细胞。下列以胶原酶消化法展述骨细胞获取方法，此外还可以通过间充质干细胞等成骨诱导获取。

二、实验材料

PBS溶液、DMEM 培养基、细胞培养相关耗材、Ⅰ型胶原酶、EDTA

三、实验方法

1、动物准备：使用3天龄的Sprague-Dawley（SD）乳鼠，颈椎脱臼处死乳鼠，浸入75%乙醇消毒，取出颅骨。

2、组织处理：用70%乙醇浸泡，PBS洗涤，刮除表面骨膜，剪成1mm×1mm骨片。

3、消化：加入0.1%Ⅰ型胶原酶，37°C下消化20min，吹打骨片，弃上清，重复此步骤三次。

加入含0.1%BSA的5mmol/L EDTA，37°C下消化20min。吹打骨片，收集上清液，离心，加入DMEM完全培养基，备用。剩余骨片则再次加入Ⅰ型胶原酶溶液，37°C下消化20min，吹打骨片，离心收集上清，加入DMEM完全培养基，备用，总共重复消化约三次。

4、收集细胞：将一共四次所得DMEM细胞溶液混合，接种于12孔培养板。

5、细胞培养：置于5% CO2、37°C培养，每3天换液1次。

注意事项：如果需要研究增殖能力较强的细胞，通常会选择成骨细胞前体或骨髓间充质干细胞（BMSCs），这些细胞在适当的诱导条件下可以分化为骨细胞，并在体外表现出较强的增殖能力。