一、概述

内皮细胞（Endothelial Cells, ECs）是单层扁平上皮细胞，它们在人体内扮演着多种重要角色，包括形成血管的内壁、参与免疫活动、维持血管张力、调节血压以及凝血与抗凝平衡等。内皮细胞的异质性在不同的组织中表现明显，即使是同一组织中的不同血管类型，内皮细胞也可能表现出不同的特性。例如，动脉、静脉和毛细血管内皮细胞在基因表达和功能上可能有所不同。此外，内皮细胞还可能根据其所处的微环境而表现出特定的表型，如在炎症或损伤后可能会表达不同的表面标记物。内皮细胞的种类多样，根据它们所处的血管类型和组织环境，可以分为不同的类型：血管内皮细胞、微血管内皮细胞、肾小球内皮细胞、肺内皮细胞等。以下通过血管内皮为例展示原代培养方法

二、实验材料

手术器械、多聚赖氨酸、0.125%胰蛋白酶、内皮专用培养基、PBS等

三、实验方法

灌注消化法能够获得纯度较高的内皮细胞，是分离血管内皮细胞的常用方法。

1、取血管：在无菌条件下取出大鼠主动脉，用PBS冲洗3-4次，洗去血液。

2、消化细胞：将血管放入培养皿中，从动脉的一段插入动脉插管，结扎固定，然后用丝线将另一端结扎。通过动脉插管向血管内注入0.125%的胰蛋白酶，直至管腔充盈，在37℃条件下，消化15min。

3、洗涤细胞：在血管的游离端切口，收集消化液，加入含血清的培养基中止消化。之后在1000rpm转速下离心5min。吸去上清液，用培养液混悬细胞制成细胞悬液。

4、包被培养容器：预先在培养容器上涂上多聚耐氨酸，过夜备用。

5、接种细胞：调整细胞悬液浓度为3×105/ml，接种细胞到预先准备的包被好的培养容器上。

6、结果观察：30min后内皮细胞开始贴壁，细胞呈圆形或多边形。

7、传代换液：37℃、C02培养箱中培养，每2-3天换液1次，约1-2周细胞将融合为单层。

注意事项：向血管腔内注入消化液时，应防止消化液溢出，以免消化血管外膜，引起成纤维细胞的污染。