概述

        与神经元细胞相比，神经胶质细胞在体外较容易培养生长。用常规的组织块法、胰酶消化法、胶原酶消化法均可从幼年或成年的动物或人的脑组织标本中培养出神经胶质细胞，而且生长稳定，不易发生自发转化，可建立起传代的二倍体细胞系。主要取材部位为中枢神经系统的灰质组织。

用品

        (1)新生小鼠脑组织。

        (2)培养液：DMEM/F12混合培养基(1:1，V/V)，可加入促有丝分裂剂表皮生长因子10ng/m，氢化可的松50 nmol/L,胰岛素50 μg/mL等。

        (3)Hanks液、0.25%的胰蛋白酶。

        (4)孔径为73μm的尼龙筛、培养瓶或培养皿、吸管、试管、烧杯、手术剪、手术刀、镊等。

步骤

        (1)无菌条件下切取小鼠脑组织，放入含 Hanks 液的培养皿中，剥除脑膜，取脑灰质部分。

        (2)将脑组织移入另一培养皿，用Hanks液洗涤2~3次，移入试管加约40倍体积的 Hanks 液，用吸管反复吹打，获得单细胞悬液。静置10min后弃上清液,重复该过程3次。

        (3)将最后一次的沉降物加入适量培养液，通过孔径为73μm的尼龙筛过滤，收集细胞悬液，调整细胞密度，以1x10⁴~1x10⁶/cm²的细胞密度接种于培养瓶，置37℃、5%CO₂孵箱中培养，细胞长满后传代培养。

操作提示

        通过上述方法得到的原代细胞主要包含星形胶质细胞和少突胶质细胞的混合细胞，在培养过程中，星形胶质细胞的比例逐渐增大，可通过振荡纯化的方法获得纯化的星形胶质细胞。

结果及鉴定

        神经胶质细胞贴壁缓慢，初期生长慢，而且混有其他种类细胞，经数次传代后可逐渐形成单一的单层生长的胶质细胞。体外培养的胶质细胞胞体较大、扁平，形状不规则，胞质较丰富，初级胞突较多而长。

        免疫组化染色检测胶质细胞特有的胶质原纤维酸性蛋白阳性，抗A2B5抗体染色阳性。