概述

         内皮细胞在血管内形成单层内表面。用于内皮细胞培养的标本多为牛主动脉，牛肾上腺皮质毛细血管，鼠脑皮质毛细血管，人脐静脉以及人皮肤和脂肪的毛细血管。培养方法主要是用胶原酶消化分离血管内皮细胞，然后培养在铺有明胶基质的培养器皿内，如果标本来源是毛细血管，培养液中需加有丝分裂剂，如来源是大血管，则不需要。（1）常规酶消化法原代培养器械和器皿。

用品

         (1)无菌条件下切取血管，长10cm,直径约大于5 mm。

         (2)混合消化液:0.25%胶原酶5份和0.1%胰蛋白酶1份混合。

         (3)M199培养液:加20%胎牛血清和抗生素。

         (4)直径10cm的培养皿或75cm'培养瓶内底面铺1.5%明胶(溶剂为PBSA)，培养过夜，去除多余明胶，加入培养液和血清，培养至细胞接种时。

         (5)小血管钳和锐利眼科剪。

步骤

         下面以牛胸主动脉为例介绍血管内皮细胞培养方法。

         (1)无菌条件下取动脉放血处死的新生牛胸主动脉10cm。

         (2)超净台内剔除动脉外膜上的脂肪组织，结扎肋间动脉残端和主动脉细段。用长血管钳外翻动脉内膜。PBSA液冲洗动脉内膜上的血液。

         (3)动脉浸入混合消化液，37℃水浴，消化20~30 min。

         (4)弃动脉，加含20%胎牛血清M199培养液终止消化。

         (5)将收集到的消化液以1000r/min速度离心5min，在培养液中洗2次。

         (6)收集细胞，重新悬浮于培养液中，接种于铺有明胶的培养皿或瓶中。

         (7)细胞长满后可用常规胰蛋白酶消化法传代培养，更换培养液时每次换原培养液 1/2 ~2/3 为好。

操作提示

         放入培养皿中的消化液不宜过多，消化时间不宜过长，避免将内皮细胞以外的其他各层组织细胞消化下来。

结果及鉴定

         获得典型上皮样细胞，可传代培养。内皮细胞能分泌第8因子(factor)，细胞内含有Weibel-Palade 小体，吞噬低密度乙酰脂蛋白，表达内皮细胞特异性表面抗原。