一、概述

肌源性干细胞（Muscle-Derived Stem Cells，MDSCs）是一类具有自我更新和多向分化潜能的干细胞，它们可以从骨骼肌中分离出来，并在适当的条件下分化为多种细胞类型，包括肌细胞、成骨细胞、软骨细胞等。MDSCs能够分化为肌细胞和成肌纤维细胞，用于治疗肌肉损伤、肌肉萎缩症和肌营养不良症。可以通过分化为心肌细胞或血管内皮细胞，用于修复心肌梗死后的心脏组织和促进血管新生。也可以用于肿瘤微环境的研究，以及开发新的抗癌策略，如通过增强免疫细胞的肿瘤杀伤能力。

二、实验材料

PBS溶液、D-Hank's液、胰蛋白酶、Ⅺ型胶原酶、 dispace酶、肌源干细胞培养基、多聚赖氨酸、细胞培养相关耗材

三、实验方法

1、实验动物：使用3-4周龄的健康未孕雌性SD大鼠。

2、取材：从大鼠身上无菌条件下取腓肠肌。

3、组织处理：将肌肉组织剪碎后用D-Hank's液吹打漂洗，静置1min，弃上清。

4、消化：0.2%Ⅺ型胶原酶37°C消化1h。再次离心并弃上清，2.2 U·mL^-1 dispace酶37°C孵育1h后，0.1%胰酶消化30min。

5、过滤：将细胞分别经100、200和400目细胞筛网过滤。

6、培养：将筛选出的细胞置于含多聚赖氨酸的培养瓶，于37°C、5% CO2培养箱孵育1h后，将未贴壁细胞转移至一新培养瓶中，换液后培养4-5天，每24h换液1次，5-6天后贴壁细胞即为MDSCs。

7、传代：细胞每2-3天换液1次，汇合度为70%-80%时传代。

8、观察：倒置显微镜观察细胞形态。

注意事项：使用适合MDSCs生长的培养基，通常使用一些生长因子。