一、概述

顺铂耐药株是指对顺铂（Cisplatin）这种化疗药物产生耐药性的细胞株。顺铂是一种广泛用于治疗多种癌症（如肺癌、卵巢癌、膀胱癌等）的化疗药物。然而，随着治疗的进行，一些癌细胞可能会通过多种机制发展出对顺铂的耐药性，导致药物疗效降低。构建顺铂耐药株的目的是为了在实验室条件下模拟临床耐药现象，研究耐药机制，并寻找逆转耐药性的方法。不同的细胞类型构建耐药株所需要的药物浓度有所不同。

二、实验材料

PBS溶液、实验所需细胞株、顺铂（Cisplatin）、细胞培养相关耗材等

三、实验方法

1、选择亲本细胞株：选择一种对顺铂敏感的癌细胞株作为亲本细胞株。

2、诱导耐药性：将亲本细胞株连续暴露于逐渐增加浓度的顺铂环境中，以诱导耐药性的产生。

这可以通过在细胞培养基中添加不同浓度的顺铂来实现。

3、细胞传代：在每个顺铂浓度下，让细胞生长至一定密度后，再更换含有更高浓度顺铂的培养基。这个过程需要重复多次，直到细胞能够在较高浓度的顺铂中生存和增殖。

4、筛选和克隆：在达到所需的顺铂浓度后，通过限制稀释法或单细胞克隆技术从耐药细胞群体中筛选出单个耐药细胞。将这些细胞克隆并在无顺铂的培养基中扩增，以获得纯的耐药细胞株。

5、耐药性确认：使用CCK8比色法、克隆形成实验或细胞计数等方法，评估耐药株对顺铂的敏感性。通过IC50值（半抑制浓度）的测定来比较亲本细胞株和耐药株对顺铂的敏感性。

6、分子机制研究：通过分子生物学技术（如PCR、Western blot、RNA测序等）分析耐药株的基因表达变化。研究耐药株中可能涉及耐药机制的基因和蛋白，如药物外排泵、DNA修复酶等。

7、稳定性测试：将耐药细胞株在无顺铂的环境中培养一段时间，然后重新测试其对顺铂的敏感性，以评估耐药性的稳定性。

8、保存细胞株：在液氮中冷冻保存耐药细胞株，以备后续实验使用。

注意事项：定期检测耐药性，以确保耐药株的稳定性。记录细胞的生长特性和耐药性变化，以便及时调整实验条件。