客户中心

NEWS CENTER

客户中心

助力生命健康领域从基础研究到产业化的加速转化

细胞传代方法

[ 时间:2024-06-03 阅读:155次 ]

概述

培养细胞传代根据不同细胞采取不同的方法。贴壁生长的细胞用消化法传代;部分贴壁生长但贴附不牢固的细胞也可用直接吹打传代;悬浮生长的细胞可以采用直接吹打或离心沉淀后再分离传代,或直接用自然沉降法吸除上清后,再吹打传代。

用品

(1)0.25%胰蛋白酶或其他消化液、培养液、Hanks 液。

(2)吸管、离心管、培养瓶(皿)、培养瓶盖、注射器、计数板、橡皮乳头。

步骤

(1)贴壁细胞的消化法传代:

①吸除或倒掉瓶内旧培养液,必要时可用Hanks液或PBS轻轻漂洗2~3次。

②以25 cm²培养瓶为例,向瓶内加入1mL消化液(胰蛋白酶或与EDTA 混合液)轻轻摇动培养瓶,使消化液流遍所有细胞表面,然后吸掉或倒掉消化液后再加1ml新的消化液,轻轻摇动后再倒掉大部分消化液,仅留0.2~0.4ml消化液。也可不采用上述步骤,直接加1~2ml消化液进行消化,但要注意尽量减少消化液的剩余量,因为消化液过多对细胞有损伤,同时也需较多的含血清培养液去抑制胰蛋白酶的活性。

③消化最好在37℃或室温25℃以上环境下进行,消化2~5min 后把培养瓶放倒置显微镜下进行观察,发现胞突回缩、细胞间隙增大以及细胞已经从培养瓶底分离为单个或成团细胞后,应立即加入适量的含血清培养液终止消化。

④如仅用胰蛋白酶可直接加含血清的培养液,终止消化。

⑤用弯头吸管,吸取瓶内培养液,反复吹打瓶壁细胞,吹打过程要顺序进行。细胞脱离瓶壁后形成细胞悬液。

⑥计数,分别接种在新的培养瓶内,根据培养细胞类型的不同,接种比例一般多为 1:3。

(2)悬浮细胞的传代:因悬浮生长细胞不贴壁,故传代时不必采用酶消化方法,而可直接传代或离心收集细胞后传代。直接传代即让悬浮细胞慢慢沉淀在瓶底后,将上清吸掉1/2~2/3,然后用吸管吹打形成细胞悬液后,再传代。

悬浮细胞多采用离心方法传代,即将细胞连同培养液一并转移到离心管内,800~1000r/min离心5min,然后去除上清,加新的培养液到离心管内,用吸管吹打使之形成细胞悬液,如有必要可计数,然后传代接种。

部分贴壁生长细胞,不经消化处理直接吹打也可使细胞从壁上脱落下来,而进行传代。但这种方法仅限于部分贴壁不牢的细胞,如Hela细胞等。直接吹打对细胞损伤较大,导致较大数量的细胞丢失,因此绝大部分贴壁生长的细胞均需消化后,才能吹打传代。

操作提示

对于贴壁细胞传代培养,通常采用0.25%胰蛋白酶很容易使细胞脱离瓶壁但是,对于上皮组织来源的细胞需要采用消化作用更强的消化液,常用0.01EDTA-0.125%胰蛋白酶混合消化液。使用含EDTA的消化液,务必进行离心洗涤细胞,除净EDTA,否则,影响细胞贴壁和生长。吹打时动作要轻柔不要用力过猛同时尽可能不要出现泡沫,这些都对细胞有损伤。细胞传代比例依细胞生长速度而定,通常正常细胞传代比例为1:2~1:3肿瘤细胞1:5~1:10。细胞传代间隔时间要相对稳定,不要忽长忽短,以免影响培养细胞的生物学性状。



品质管理
高质量的数据+快速的周转期
技术平台
2000平米实验平台+硕博团队
合作客户
制药企业、医务工作者、科研人员
Copyright © 2023 潮新(南京)生物科技有限公司版权所有  苏ICP备2024062998号-1